Морда ежика — 53 фото

1

Животное с мордой ежа

2

Колючие Ежи

3

Ядовитые ежики

4

Ёжики живые

5

Ежи Подмосковья

6

Грызуны и Ежи

7

Серенькие ежики

8

А Ежик ночью убежал

9

Про ежика всеядного

10

Индокитайский Ежик

11

Трудолюбивые животные

12

Еж зверь

13

Ежа трава картинки

14

Даурский ёж

15

Голова ежа

16

Ежик на рабочий стол

17

Блинский ёж

18

Даурский ёж

19

20

Ёж на полянке

21

Ежик на темном фоне

22

Носик у ежика

23

Миленькая мордочка ежика

24

Еж животное

25

Еж обыкновенный красивый

26

Колючки ежика

27

Еда с мордочками

28

Фото старого ежа

29

Необычный Ежик

30

Забавные мордашки животных

31

Морда ежа

32

Ежик на рабочий стол

33

Обои на рабочий стол Ежик

34

Мордочка ежика в траве

35

Маленький Ежик

36

Крупные Ежи

37

Люблю ежика

38

Даурский ёж

39

Доброе утро Ежик

40

Морда ежа

41

Смешной Ежик

42

Еж ловит мышей

43

Ежик в траве

44

Голобрюхий ёж

45

Милые ежики

46

Нос ежика

47

Европейский еж

48

Ежик Фыр

49

Еж обыкновенный Лесной

50

Морда ежа

51

Обыкновенный ёж

52

Даурский ёж с потомством

Ежиная мордочка (61 фото)

1

Ежи для детей

2

Забавные ежики

3

Горный Ежик

4

Обыкновенный ёж с ежатами

5

Милые ежики

6

Колючки ежа

7

Индокитайский еж

8

Носик у ежика

9

Блинский ёж

10

Обыкновенный ёж

11

Милый Ежик

12

Мордочка ежа

13

Мордочка ежика

14

Обыкновенный ёж с ежатами

15

Ежи млекопитающие животные

16

Красивый Ежик

17

Hemiechinus hypomelas

18

Ежи баба

19

Еж картинка

20

Еж животное

21

Йож обыкновенный

22

Ушастый ёж

23

Ежиная мордочка

24

Милый Ежик

25

Обыкновенный ёж

26

Ежик в клубочке

27

Обыкновенный еж — Erinaceus europaeus l.

28

Лесные животные ёж

29

У ежа ежата

30

Еж сворачивается в клубок

31

Голобрюхий ёж

32

Ежиные мордочки

33

Даурский ёж питание

34

Ежиные тропы

35

Маленький Ежик

36

Лицо ежа

37

Милые Ежи

38

Животные осенью

39

Европейский еж

40

41

Ушастый ёж с ежатами

42

Колючий Ежик

43

Свернувшийся еж

44

Еж сворачивается в клубок

45

Еж это млекопитающее

46

Обыкновенный ёж

47

Нос ежа

48

Нос ежа

49

Картинка растение ежа

50

Маленькие Ежи

51

Мордочка у ежа маленькая с вытянутым носом

52

Ежиная ферма

53

Ежик фото

54

Зеленый Ежик

55

Еж обыкновенный 4к

56

Ежиная мордочка

57

Мордашка ежика

58

Еж животное

59

Дыхание ежа

60

Иглы обыкновенного ежа

61

Мордочка ежа

Как нарисовать ежика поэтапно. Рисуем ежика шаг за шагом — мастер-класс для детей с яркими фото-инструкциями

Ты слышишь этот шорох? Вон там, в траве! Это же ежик прогуливается лесными дебрями. А ты знаешь, что это животное имеет на своем теле 5000 иголок? Они прекрасно защищают ежика от опасных хищников.

28 196 т.

Этого лесного жителя нарисовать очень легко. Забавная зверушка обязательно будет радовать глаз Твоих родных и друзей. Ознакомься с простой инструкцией рисования ежика, заодно и несколько интересных фактов узнаешь.

1. Нарисуй продолговатый горизонтальный овал с заостренным, поднятым кверху кончиком с одной стороны. Это будущая мордочка животного.

2. Обозначь кончик носа черным кружком, но не закрашивай его полностью. Маленький белый отблиск добавит рисунку реалистичности. Так же, с отблеском, нарисуй ежику глаз, затем — улыбку, дорисуй ухо и четыре лапки.

3. Теперь нарисуй один равномерный ряд иголочек вокруг туловища ежа.

Все ежики имеют хвосты, хотя на рисунках их не изображают. Длина хвоста — всего 3 см и под иглами он совсем не заметен.

4. Добавь еще несколько рядов иголок, чтобы полностью покрыть ими тело ежика. Чем больше будет колючих иголок, тем объемнее получится ежик. Иглы могут быть темными, а можно добавить в них несколько светлых штрихов.

Интересно знать: на иголках ежа могут размножаться различные паразиты, такие как блохи и клещи. А лишается он их надежным и давно проверенным способом — заходит в воду до кончика носа

. Но стоит ежику пройтись лесными зарослями, как его иглы снова загрязняются.

5. Раскрась лесного жителя. Туловище и мордочка будут коричневыми, лапы — серыми, а нос останется черным. Ежик готов!

Можно нарисовать и такого ежика.

Парадокс! Как часто на страницах книг мы видим ежика, который несет на своих иголках яблоко или грушу, и невольно представляем, как зимой он питается этими нехитрыми запасами. Однако в действительности ежи едят насекомых, лягушек, червячков, а фрукты на зиму им не нужны — ведь зимой они… спят.

Дорогой Друг! Надеюсь, рисование ежика принесет Тебе удовольствие и приятные эмоции. Желаю удачи!

Заметили орфографическую ошибку? Выделите её мышкой и нажмите Ctrl+Enter

Ежик – ночной охотник — Парки москвы

   Наверное, нет на Земле человека, который бы не испытывал повышенного интереса к ежам. Почему? Да потому, что это очень необычное животное постоянно от нас прячется – то под колючей спинкой, то под покровом ночи…

 

   Колючий панцирь полностью покрывает спину и бока животного, а на лбу ежик имеет своеобразный «пробор» — полоску голой кожи. Иголочки гладкие и блестящие. Короткие уши. Тело, не покрытое иголками, имеет шерстку серовато-коричневого цвета. Мордочка вытянутая, подвижная.

   В России распространен еж обыкновенный. Он обитает в средней полосе европейской части страны, на Среднем Урале и в южной части Западной Сибири в лиственных и пойменных лесах, на опушках и полянах, в парках, рядом с человеком. Избегает болот и сплошных лесов, предпочитая им более разреженные и сухие участки.

   В дневное время еж отдыхает в гнезде, построенном из веток и листьев, чаще под корнями деревьев, а иногда и в других укрытиях. Днем его можно встретить только в весеннее время, когда животное отъедается после зимней спячки. Встретив хищника, еж сразу же сворачивается, принимая форму колобка и выставив иголки. На своих коротких лапках от волка и лисицы ежику не убежать, поэтому он и прячется под своей «броней».

   Питаются ежи в основном насекомыми, лягушками и червями, а если повезет, то полевками, ящерицами, змеями, птичьими яйцами, птенцами. Не откажутся и от опавших плодов и ягод. На охоту ежи выходят в ночное время, здесь в роли их главных советчиков выступают тонкий слух и острое обоняние. За ночь животное может пройти несколько сот метров, раскапывая почву или собирая корм с земли. На первый взгляд ежик может показаться безобидным увальнем, но, если ему попадается крупная добыча, например, крыса или змея, то он проявляет максимальную быстроту, убивая жертву молниеносным укусом в затылок.

   Ранней весной, отойдя от спячки, ежи начинают создавать пары. Брачный период этих животных сопровождается песнями самцов, которые представляют собой низкие монотонные свисты. После 5-6 недель беременности самка приносит от 2 до 5 голых и слепых детенышей. Через несколько часов их тело покрывается мягкими иголочками. Спустя 2-3 недели у них открываются глазки, а, достигнув месячного возраста, они уже начинают сами добывать себе пищу. Полностью зрелыми ежи становятся лишь в 2-х летнем возрасте.

   Зиму они коротают, впадая в спячку. Но для успешной зимовки ежу необходимо хорошо подготовиться, иными словами, нагулять побольше жира. За счет накопленных жировых запасов ежи благополучно переносят многомесячную спячку.

   Тот, кто мечтает встретить ежика, должен чаще посещать парки ранней весной. В это время ежи охотятся как ночью, так и днем, чтобы восполнить свои силы. Те же, кто задержался в парке до наступления первых сумерек, тоже могут стать свидетелями, как нетерпеливый ежик покинул свое убежище, чтобы успеть подобрать лакомый кусочек…

В парках Москвы много других интересных жителей, их фотографии и описания смотрите в разделе Живность.

Ежик африканский карликовый и другие породы

Африканский карликовый зверек.

Люди с древних времен держали у себя в жилище домашних животных. Кому-то по душе кошки и собаки, а кто-то в восторге от экзотических зверьков.

Одним из интересных, необычных созданий является африканский ежик.

Увидев маленького зверька, люди умиляются его внешним видом и забавными повадками.

Возникновение вида

Встретить в дикой природе африканского ежа невозможно. Порода была создана искусственно, специально для содержания в домашних условиях, путем спаривания двух видов: алжирского и африканского. На свет зверьки появились относительно недавно, но сразу покорили сердца миллионов любителей домашней экзотики.

Перед селекционерами стояла задача получить маленькое животное с покладистым характером, отличающееся от диких ежей тем, что не будет впадать в спячку. В результате получился маленький зверек, легко помещающийся на ладошке. Также ученые позаботились о том, чтобы животное не вызывало аллергии.

Как выглядит: описание породы

Общительные и дружелюбные животные.

Внешне африканский ежик очень похож на лесного родственника. У него небольшое мягкое тело, короткие лапки и любопытная вытянутая мордочка, на которой можно увидеть незначительный волосяной покров. На передних лапах находится пять пальцев, а на задних всего четыре.

Удлиненный нос постоянно подергивается, так как зверек при помощи нюха ищет себе пропитание. Овальные ушки плотно прижаты к голове. Вес декоративного ежика составляет 350-500 грамм, а длина тела достигает 20 сантиметров.

На теле одного ежика можно насчитать около 10 тысяч иголок. Обновляет «шубку» зверек один раз в три года.

Вся спина, бока и макушка маленького тела покрыты иголками длиной около 3 сантиметров. Цвет колючек настолько разнообразен, что поражает воображение даже самого искушенного заводчика домашних питомцев. Наиболее распространенные:

• Соль с перцем или черный. У зверька с такой окраской темные не только иголки, а также уши и мордочка.
• Серый. Цвет «шубки» может колебаться от серого до темно-коричневого. Ушки в этом случае будут темно-серыми, а мордочка черного оттенка.
• Шоколад. Этому цвету соответствуют лишь иголки животного, ушки будут серые, а вот маска немного светлее, чем колючки.
• Коричневый. У этих ежиков можно наблюдать розовые ушки, которые отлично сочетаются со светло-коричневой мордочкой, а вот иголки зверька будут цвета дубовой коры. Помимо этого глаза малышей с таким окрасом имеют красивую голубую каемку.
Альбинос.
• Корица. «Шубка» ежиков светло-коричневого цвета, ушки розовые, а глаза бордовые. При этом маска на мордочке практически не заметна.
• Цинакот. Это комбинация светло-коричневого и бежевого оттенков.
• Шампань. Отличается бледно-бежевыми иголками и светлыми ушками. Глаза у ежиков этой окраски алых тонов.
• Пинто. Небольшая часть иголок не имеет пигмента.
• Альбиносы. Это чисто белые ежики с алыми глазами. Встречаются такие зверьки очень редко, так как не в каждом помете рождаются подобные малыши.

Особенностью физиологии африканских ежей является лысый пробор на головке. Появился он из-за особенного расположения спинных мышц и необычным ростом иголок на голове.

Ежи имеют природный иммунитет к укусам ядовитых змей, мышьяку, цианистому калию, а также другим ядам.

Африканские ежики довольно общительные, легко идут на контакт с человеком. Быстро привязываются к новому владельцу и всем членам семьи. Они спокойно чувствуют себя в одиночестве, не требуя пары. Держать в одной клетке двух и более особей не рекомендуется, так как они могут что-то не поделить, а результатом раздора станет драка.

Питомец не даст себя в обиду и может укусить.

Африканские ежи очаровательные, очень милые существа. Все же не стоит допускать бесконтрольное общение зверьков с маленькими детьми.

Это необходимо сделать по причине того, что дети невольно могут напугать пугливых питомцев, которые в ответ способны укусить ребенка.

Помимо этого ежики покрыты острыми иголками, которые также не являются безопасными. При неправильном обращении с животным малыш может легко пораниться.

Сколько стоит африканский еж?

Как определить возраст ежика в домашних условиях

Средняя продолжительность жизни ежиков 6-7 лет. Взрослым животное считается уже в возрасте одного года. Перестают зависеть от своих родителей эти зверьки на 5 месяце жизни. Для определения возраста существует несколько способов:

• По иголкам. У маленьких ежат колючки довольно мягкие, лишь с возрастом они твердеют. Чем старше животное, тем острее его иголки. У старых особей колючки притупляются. Если у животного ровные и острые иглы, которые распределены по телу равномерно, то можно предположить, что зверьку около двух лет. В первый год жизни иголки имеют светлый оттенок, чем старше животное, тем они темнее.
• По меху. На свет ежики появляются голыми и беззащитными. Мех на мордочке и боках в первый год жизни зверька будет светлым. Темнеет он с возрастом. Если животное находится в преклонном возрасте, то он выглядит неопрятно и растрёпано.
Малыши быстро растут и прибавляют в весе.
• По зубам. По состоянию зубов также можно определить, сколько лет зверю. У трехлетнего животного они слегка сточены, а укус ежа напоминает сильный щипок. Взрослые особи пережевывают пищу не спеша, а молодые зверьки, имеющие острые зубки, пищу перерабатывают гораздо быстрее. Но в большинстве случаев опираться при определении возраста только на состояние зубов ежа не стоит. Принято считать, что оно в большей степени зависит от условий содержания зверька, а также состояния его здоровья.
• По весу. Достигший трехлетнего возраста еж, весит примерно 400 грамм. На свет зверьки появляются по 25-30 грамм. В течение двух месяцев малыши активно питаются, быстро прибавляя в весе. Но этот показатель является относительным, так как увеличение веса зависит от условий содержания и режима кормления особи.

Считается, что единого метода, при помощи которого можно установить точный возраст африканских ежиков, не существует. Но узнать приблизительный возраст животного, используя предложенные варианты, вполне возможно.

Отзывы заводчиков африканских ежей свидетельствуют о том, что держать в домашних условиях зверька легко и интересно. Маленькое создание станет любимцем всей семьи, приведет в восторг и умиление, как детей, так и взрослых.

Интересное видео

Почему ёжик колючий? | Описания и фото животных

 11165

У самых древних ежей иголок вообще не было. Наверное, это были и не ежи ещё, а их ископаемые предки. Была шерсть, которая для дополнительной защиты ёжика от желающих его съесть, постепенно превратилась в колючки. Обросли иголками далеко не все виды ежей, у некоторых просто шерсть стала очень жёсткой. А иголки очень похожи на волосы до сих пор: так же растёт из фолликула, такая же гладкая, но внутри полая. У нас иногда волосы встают дыбом (например, от ужаса), а ёжик умеет свои иголки поднимать в любой момент, когда захочет. У него мышца присоединяется к каждой игле, и в поднятом состоянии они перекрещиваются, то есть защита усиливается многократно — настоящая броня. Мы теряем волосы, когда расчёсываемся (на самом деле, это обмен, на месте выпавшего растёт новый). И ежи точно так же меняют иглы, но значительно реже: каждый год или полтора теряют всего одну колючку.

Некоторые люди думают, что иглы нужны ежу для переноски еды. Это не так. Никогда на спине ёж ни яблок, ни грибов не носит. Он вообще хищник, и потому растительность его интересует очень мало. Иголки ежу нужны сугубо для защиты. Как только увидит опасность (лису, например), сворачивается в тугой колючий клубок и взять его, казалось бы, невозможно. Но лисы знают способ. Они ёжика просто катят до ближайшего ручья или лужицы. В воде ёжику плохо. Плавать он может, но для этого нужно лапками шевелить, значит — раскрыться. Тут лисичка и делает «хвать!». Лапки, живот и мордочка у ежа без колючек. Но таких умных, как лиса, в лесу не так много, в основном иголки защищают замечательно.

Однако, существуют и издержки такой глухой защиты. Прогуливаясь, ёжик буквально расчёсывает травку своими иголками. А потому все клещи, все блохи оказываются у него под иголками. Он их не только убрать или прогнать, даже почесать укусы не может, бедный. Можно себе представить эти страдания.

Текст: Людмила Гаркавая

Читайте и комментируйте наши материалы прямо сейчас! Делитесь своим мнением, нам очень важно знать, что именно Вам нравится на нашем портале! Оставляйте отзывы, делитесь ссылками на сайт в социальных сетях и мы постараемся удивлять вас еще более интересными фактами и открытиями! Уделив всего лишь пять минут времени, Вы окажете неоценимую поддержку порталу и поможете развитию сообщества ЗООГАЛАКТИКА!

» Оставить комментарий «

 

Как нарисовать ёжика карандашом поэтапно. Рисуем ёжика карандашами

Этого лесного жителя нарисовать очень легко. Забавная зверушка обязательно будет радовать глаз Твоих родных и друзей. Ознакомься с простой инструкцией рисования ежика , заодно и несколько интересных фактов узнаешь.

1. Нарисуй продолговатый горизонтальный овал с заостренным, поднятым кверху кончиком с одной стороны. Это будущая мордочка животного.

2. Обозначь кончик носа черным кружком, но не закрашивай его полностью. Маленький белый отблиск добавит рисунку реалистичности. Так же, с отблеском, нарисуй ежику глаз, затем — улыбку, дорисуй ухо и четыре лапки.

3. Теперь нарисуй один равномерный ряд иголочек вокруг туловища ежа.

Все ежики имеют хвосты , хотя на рисунках их не изображают. Длина хвоста — всего 3 см и под иглами он совсем не заметен.

4. Добавь еще несколько рядов иголок, чтобы полностью покрыть ими тело ежика. Чем больше будет колючих иголок, тем объемнее получится ежик. Иглы могут быть темными, а можно добавить в них несколько светлых штрихов.

5. Раскрась лесного жителя. Туловище и мордочка будут коричневыми, лапы — серыми, а нос останется черным. Ежик готов!

Можно нарисовать и такого ежика.

Парадокс! Как часто на страницах книг мы видим ежика, который несет на своих иголках яблоко или грушу, и невольно представляем, как зимой он питается этими нехитрыми запасами. Однако в действительности ежи едят насекомых, лягушек, червячков, а фрукты на зиму им не нужны — ведь зимой они… спят.

Дорогой Друг! Надеюсь, рисование ежика принесет Тебе удовольствие и приятные эмоции. Желаю удачи!

Маленький, смешной ежик – герой многих детских мультиков, стихов, рассказов, сказок, комиксов, раскрасок, картинок. Дети очень любят этого симпатичного лесного зверька. Когда детишки впервые пробуют рисовать картинки, они пытаются изображать различных зверей: домашних и лесных. На этом уроке мы научим вас рисовать поэтапно ежика. Это будет не трудно, только запаситесь цветными карандашами, альбомными листами и терпением. Итак, начнем!

1 этап. Простым карандашом серого цвета начнем рисовать наш объект. Примерно посередине листа бумаги намечаем линии тела маленького ежика. Рисуем немного волнистую линию спинки справа. Затем, от нее вверху и вперед проведем две сужающиеся линии, это будет мордочка ежика. На кончике мордочки показываем большой круг – нос. Внизу линии шеи и спинки соединяем более выпуклой линией живота. Пусть у нас будет такой, немного пузатенький смешной ежонок.

2 этап. На носу рисуем отблеск света – такое пятнышко. Далее, большой овальный глаз, над ним линию брови, под ним линию улыбающегося ротика. Внизу, чуть более ниже линии «талии» проведем черту пояса штанишек милого зверька. Поверх пояса рисуем лапку с растопыренными пальцами.

3 этап. Теперь на голове показываем вверх торчащие несколько иголок. Они напоминают волосы, но на самом деле это, конечно, иглы. Сбоку рисуем маленькие аккуратные уши небольшими черточками. Внизу под животиком рисуем линии шортиков, или штанишек. В них ножки ежика. Они показаны довольно толстенькими, плотненькими. Ножки обуты в стильные башмачки наподобие кроссовок. На них шнурки продеты в дырочки.

4 этап. Тут на голове и по всей спинке ежика надо нарисовать много-много иголочек разной длины. Пусть у нашего героя будет очень пышная и густая колючая шубка. Располагаем черточки иголок равномерно по всей поверхности спинки сверху и донизу.

5 этап. Здесь начинаем обводить контуры ежика. Делаем это острым черным карандашом. Потихоньку аккуратно обрисовываем линии мордочки, тела, ручек, ножек, глаза, штанишек, обуви.

6 этап. Раскрасим нашего маленького смешного героя поярче. Вначале сделаем объемным его носик, оттеним его в некоторых местах. Затем возьмем два ярких цвета: малиновый или розовый и голубой и закрасим глаза, штанишки и обувь зверька.

7 этап. Коричневым, желтым и оранжевым карандашами разукрасим все тельце ежика и его красивые носочки. Тельце надо раскрасить коричневым и оранжевым, соединяйте цвета, не бойтесь экспериментировать с наложением двух и более цветов. Не забудьте поставить точечки, пусть ежик будет с забавными веснушками на мордочке.

8 этап. Вот и готовая работа! Ну как вам ежик, ребята? Не правда ли, рисовать его совсем не сложно? Получился он у нас очень красивым и милым. Благодаря нашему уроку поэтапного рисования, вы научились рисовать ежика правильно и быстро.

Маленький колючий ежик с проницательными черными глазками и забавной остренькой мордочкой – любимец детей. Не только потому, что является персонажем любимых с детства мультфильмов. Любопытный по своей природе, этот обитатель лесов и парков интересуется людьми и частенько по ночам выходит к домам в поисках лакомств.

В этом уроке представлено несколько интересных способов, позволяющих научиться рисовать ежа, как обычного, так и ушастого его собрата.

Простой пример	Еще один пример ежа	Реалистичный пример
Еж с яблоком	Ушастый еж

Простой пример

Для начала попробуем разобраться, как нарисовать ежа поэтапно. Это наиболее эффективный метод для обучения новому рисунку, он подойдет как опытным, так и начинающим художникам.

Этап 1
Подготовим эскиз. Для ежика можно сделать такой: горизонтальный овал, разметка мордочки в виде уголочка впереди, четыре лапки-кружочка.

Этап 2
Начнем рисовать остренькую мордочку нашему ежику. Сначала изобразим контур.

Затем отделим ее от туловища, одновременно рисуя видимое ушко. Добавим глазик, нос, рот.

Обведем колючий контур при помощи зигзагообразной линии.

Из основных частей осталось нарисовать лапки и соединить контур брюшка.

Этап 3
Детали рисунка – иголочки по всей поверхности колючей шкурки. Можно также добавить траву, по которой бежит ежик.

Продолжаем учиться рисовать маленького ежика

Интересный способ нарисовать ежа карандашом предложен ниже. Он немного сложнее предыдущего и потребует наличия минимальных навыков рисования.

Набросок будущего ежика состоит их двух кругов: большого туловища и маленького для головы. Размечаются четыре лапки.

Имеющийся набросок уточняем: соединим голову и тело, проведем линию роста иголочек. Наметим глаз и лапки.

Контур обводим штриховкой, имитирующей иглы. Добавляем пальчики на лапках, ушки, нос.

Заполняем защитную часть покрова иголочками, а на мордочке и брюшке рисуем шерстку.

Осталось добавить тени и наш ежик готов бежать в лес.

Реалистичный пример

Теперь можно нарисовать ежа карандашом. Поэтапно это сделать легче всего. Предлагаем наиболее интересную последовательность выполнения.

Чтобы рисунок получился гармоничным и пропорциональным, необходимо, прежде всего, подготовить эскиз. Один из возможных вариантов – нарисовать рамку, внутри которой разметить само изображение. В нашем случае это будет выглядеть так:

Отделим мордочку ежа от его туловища и закрасим его глазки, носик.

Рисуем колючий защитный покров ежонка. Для этого сначала равномерно нанесем сами иголочки, а затем добавим их по контуру и внутри для густоты.

Закрасим брюшко штриховкой, имитируя короткие густые шерстинки. Снизу прорисуем их более плотно, остальные сделаем светлее.

Детализируем остальные части. Добавим шерстки на мордочке, уточним нос и глазки.

Отделим более плотными штрихами голову от туловища, нарисуем ушки.

Осталось прорисовать лапки с маленькими коготками. Наш ежонок готов.

Ежонок с яблоком

Известно, что иголки не только защищают малыша от опасностей, но и помогают транспортировать припасы и строительные материалы к гнездышку. Поэтому теперь предлагаем потренироваться рисовать ежа для детей с яблочком на спине.

Эскиз – горизонтальный овал. Именно эту фигуру напоминает бегущий ежик. Чуть справа кружок – будущий рисунок яблока.

Дорисуем слева вытянутую любопытную мордочку, снизу – четыре лапки.

Прорисуем более точно мордочку, яблоко на спинке.

Заполняем иголочками тельце нашего ежонка.

Ежик с яблоком готов, теперь можно его раскрасить.

Ушастый еж

Ушастый ежик – теплолюбивый родственник нашего обыкновенного. Он очень похож на него, отличие лишь в более крупных ушках. Попробуем разобраться, как нарисовать ушастого ежа. Это не сложнее, чем изображать самого обычного. Кроме этого способа, можно использовать любой из предложенных выше, достаточно лишь обратить внимание на уши, сделав их чуть больше обычного.

Рисуем два круга, один из которых – тельце, а другой – голова будущего ежа.

Из маленького кружочка вырисовывается симпатичная мордочка. На этом этапе можно разметить лапки.

Обводим весь контур фигурки, а носик и глазки прорисовываем более тщательно. Также рисуем ушки, обращая внимание на характерный размер.

Поскольку основные части изображены, можно удалить вспомогательные линии.

Осталось добавить побольше иголок. Еж готов!

Если малыш вдруг спросит, как нарисовать ежа, лучшим вариантом будет показать ему мастер-класс, где даётся пошаговая инструкция этого процесса. Главное в этот момент — это выбрать тот вариант, который подойдёт начинающему художнику по возрасту.

Мастер-класс «Как нарисовать ежа» для малышей 3-4 лет

Рисунок с наложением теней

И самым сложным является вариант изображения ежа не схематично, а с наложением теней — реалистично, максимально приближенно к натуральному образу животного. Хотя если внимательно присмотреться, то можно сделать вывод, что, следуя пошаговой инструкции предыдущего мастер-класса «Как нарисовать ежа»(поэтапно для младших школьников и старших дошкольников), можно изобразить это животное, а затем просто правильно наложить тени — вместо схематичного рисования чёрточек-иголок. Следует заметить, что для изображения колючей шубки нужно вовсе не рисовать иголки, а, наоборот, оставлять некоторые из них незакрашенными.

Теперь ребёнок любого возраста сможет без труда нарисовать этого колючего зверька, ознакомившись с представленными здесь мастер-классами.

Ежик мал, но медведю боль причиняет, говорится в известной поговорке. Действительно, это животное просто необыкновенное! Маленькое и милое, приводящее детей и взрослых в восторг, оно не по зубам хищникам. Знают ли дети, что ежик, которого многие кормят молочком из блюдца, прекрасный охотник, и его жертвами становятся не только гусеницы и жучки, но даже позвоночные – ящерицы, змейки и мыши?

Фото и картинки для детей с ежами, изображенными в дикой природе, в зоопарке или в качестве персонажа сказки или мультфильма, помогут детям узнать больше об образе жизни и повадках животного. Пользуясь образцами, малыши смогут нарисовать самостоятельно карандашом или красками.

Фото ёжика для детей

Еж обыкновенный — всеядное млекопитающее, распространенное в Евразии. Он имеет довольно компактные размеры – до 30 см в длину. Вес у животного тоже небольшой – от 600 до 800 г. Если посмотреть фотографии и картинки для детей, где еж изображен, можно увидеть, что у него вытянутая мордочка, остренький носик, маленькие ушки и трехсантиметровый хвостик. Голова, бочки и спинка животного покрыта частыми и короткими (около 2 см в длину) иголками. Мордочка, брюшко и ноги ежа иголок лишены, зато эти части его тела покрыты густыми грубыми волосками.

Интересный факт для малышей и взрослых: иголки ежика растут так же быстро, как волосы человека. Они полые внутри, полости эти заполнены воздухом. У взрослой особи может быть до 5 000 остреньких иголок! И, также как и волосы, иголки тоже обновляются. В течение года выпадает, а потом заново вырастает каждая третья.

Прикольные и смешные картинки с ёжиками

Новорожденные или совсем маленькие ежата – незабываемое зрелище для детей и взрослых. Их у мамы-ежихи рождается от 3 до 8. Малыши появляются на свет слепыми, без иголок. Но оборонительные колючки, сначала мягкие и редкие, начинают расти на их головках, бочках и спинках буквально через пару часов.

И маленькие, и взрослые ежи живут в гнездах, где проводят большую часть времени. Они проявляют активность и охотятся в ночное время.

Ёжик умывается, в лесу, с яблоком, с грибами

Забавные маленькие животные привлекают внимание деток именно своими иголками. Существует в Боснии легенда, что колючки эти животное носит неспроста. Когда-то сам черт расчесывал свою шевелюру, и волоски, которые упали на землю, превратились в ежей.

Ежику иголки нужны для защиты. Часто можно увидеть изображения животных, несущих грибы и яблоки наколотыми на спинке. Ежик может перенести на иголках листья для гнезда, но не пищу. Фотографии такого рода всегда постановочные.

А еще, ежики любят водные процедуры! Посмотрите на фото, как здорово плещется этот малыш.

Мультяшныё ёжики. Угадай мультик по картинке

Малышам всегда нравились прикольные советские, отечественные и зарубежные мультфильмы про животных, в том числе и ежей. Мультяшный Ежик в «Смешариках» — мудрый, рассудительный и несколько флегматичный. Японский Соник, главный персонаж одноименной компьютерной игры, комиксов и мультфильма, настоящий супергерой, наделенный антропоморфными чертами и сверхъестественными силами. А «Ежик в тумане» — мультик, который обожают и с удовольствием пересматривают не только карапузы, но и взрослые. Его буквально растащили на цитаты! «Когда пропадаешь, надо заранее предупреждать своих друзей.» чего только стоит! Мультяшные ежики на картинках все такие разные, но одинаково забавные.

Нарисованные цветные животные. Рисунки ёжика карандашом

Еж обыкновенный – вид достаточно многочисленный. Его представителей можно увидеть не только в дикой природе, но и вблизи человеческих жилищ в деревнях и даже больших городах. Если постараться, колючего животного даже можно поймать, чтобы рассмотреть поближе или попробовать нарисовать карандашом. Но для малышей или для начинающих будет легче срисовать его с иллюстрации в энциклопедии.

Рисунки с ежиками для детей всегда такие милые! Кто бы мог подумать, что у этого животного острые когти и зубы, которые оно использует для охоты на насекомых, рептилий и мелких млекопитающих.

На эти зарисовки лесного обитателя карандашом ребенку стоит обратить внимание. На них он настолько реалистичный, будто бы сфотографированный.

Рисунок карандашом поэтапно для детей и начинающих

Вооружившись карандашом, ребенок может нарисовать своего собственного колючего ежика таким, каким он себе его приставляет. Но может быть смешным или очень похожим на настоящего, наделенным чертами человека или изображенным в соей естественной среде. Чтобы рисунок получился красивым и технически правильным, юный художник может воспользоваться схемами рисования карандашом поэтапно, выбрать наиболее удобное для обучения фото или видео.

Это видео поможет малышу нарисовать колючего обитателя леса шаг за шагом.

Стишки и видео для детей детского сада и младшей школы

Готовя занятие по природоведению для детей детского сада или младшей школы, педагоги могут воспользоваться картинками с изображением ежей, а также познавательными видео. Тренируя память и речь, малыши могут учить простые стишки про этих милых и забавных животных.

Короткие стишки для детей

Детям 3-7 лет полезно учить стишки. Чтобы ребенок с энтузиазмом отнесся к процессу учения и успешно справился с поставленной перед ним задачей, тема и главный герой стихотворного произведения должны быть ему интересны. Малыши любят зверушек, поэтому смешные стишки про ежиков обязательно будут им по душе.

Еж — хитроумный обитатель леса. В этом веселом стишке благодаря смекалке ему удалось спастись от дождика.

Ежики — семейные существа, нежно заботящиеся о своем потомстве. Как раз об этом следующий сток.

Детское видео о ежах

А теперь пусть карапуз отдохнет и посмотрит старый добрый мультфильм «Девочка и ежик».

У этих веселых друзей из мультика в канун Нового года не оказалось елки. Ежик предложил в качестве праздничного дерева… себя!

В этом видео-ролике прикольный ежик учит малышей считать от 1 до 5.

ежик | млекопитающее | Britannica

hedgehog , (подсемейство Erinaceinae), любой из 15 видов насекомоядных животных Старого Света, обладающих несколькими тысячами коротких гладких колючек. Большинство видов весят менее 700 граммов (1,5 фунта), но обычный западноевропейский еж ( Erinaceus europaeus ) может вырасти до 1100 граммов. Длина тела от 14 до 30 см (от 5,5 до 12 дюймов), короткий и редко покрытый мехом хвост размером от 1 до 6 см. Помимо трех видов евразийских ежей (род Erinaceus ), встречаются четыре африканских ежа (род Atelerix ), шесть пустынных ежей (род Hemiechinus ) и два степных ежа (род Mesechinus ).Европейские ежи содержатся в качестве домашних животных, как и африканский карликовый еж ( Atelerix albiventris ).

Все ежи похожи по форме тела, но некоторые пустынные виды имеют более крупные уши и более длинные ноги. Короткое коренастое тело густо покрыто шипами, за исключением нижней части, ног, лица и ушей. Шипы кремового цвета окаймлены коричневыми и черными полосами, а окраска верхней части тела варьируется от пятнисто-кремовой до коричневой, в зависимости от ширины пигментированных полос; некоторые люди черные (меланисты).Нижняя сторона покрыта редкой грубой шерстью от белого до черного (иногда с пятнами), в зависимости от вида. Лицо может быть белым, коричневатым или иметь замаскированный узор. Конечности тонкие и очень короткие, но лапы большие и с длинными изогнутыми когтями (первый палец небольшой или отсутствует у Atelerix ). Хотя глаза большие, зрение плохое. Однако слух и обоняние острые; уши бросаются в глаза, а заостренная подвижная морда заканчивается влажным безволосым носом.

Британская викторина

Викторина о необычных питомцах

Вы бы завели домашнее животное с колючками? А как насчет того, что может поместиться в руке, но пугает соседских детей? Посмотрите, как много вы знаете о нетрадиционных животных, которых люди держат в качестве домашних питомцев, в этой викторине.

Ежики приседают, шипят и выпрямляют свои шипы при малейшей опасности, но их лучшая защита — это свернуться в защитный мяч.«Сворачивание» возможно прежде всего благодаря мышце, которая окружает тело от шеи до крупа по бокам тела прямо под кожей и в которую встроены периферические шипы. Когда животное сворачивается, эта мышца и несколько более мелких соединительных мышц сокращают верхнюю часть тела в сумку (как шнурок), в которую втягиваются голова, тело и ноги. Обычно косые шипы становятся прямостоячими, и животное превращается в клубок огромных острых шипов, полностью защищающих уязвимую голову, придатки и мягкий живот.В этой конфигурации ежи обычно защищены от хищников-млекопитающих, но они все еще уязвимы для некоторых видов ястребов, орлов и сов из-за чешуйчатых ног и длинных острых когтей птиц. Ежики ходят медленно или короткими быстрыми шагами, в зависимости от вида, и часто останавливаются, чтобы понюхать воздух. Они также способны на короткие скачки скорости, поднимая свое тело высоко над землей, когда бегают по голым подошвам ног.

Ежики в основном ведут ночной образ жизни, но иногда активны днем ​​после небольшого дождя.Они наземные, хотя некоторые могут лазать и плавать. Днем ежи укрываются под растительностью, в расщелинах скал, под нависающими уступами скал или в норах, которые они выкапывают передними лапами. Они также используют норы других млекопитающих, особенно зайцев и лисиц. Некоторые виды, включая западноевропейского ежа, впадают в спячку в зимние месяцы, накапливая жир под кожей, вокруг внутренних органов и плеч. При температуре гибернации 4 ° C (39 ° F) сердцебиение замедляется со 190 до 20 в минуту, а дыхание сокращается до 10 вдохов в минуту.Другие виды, обитающие в особенно жарких или сезонных регионах, могут впадать в короткие периоды оцепенения. Они строят большие гнезда из сухой растительности в норах или под растительностью на сухой земле.

Получите подписку Britannica Premium и получите доступ к эксклюзивному контенту. Подпишитесь сейчас

Рацион ежа состоит из насекомых, других членистоногих (включая ядовитых пауков и скорпионов), улиток, слизней, лягушек и жаб, ящериц, змей (включая ядовитые виды), птичьих яиц, птенцов и упавших плодов.Ежики используют свое острое обоняние, чтобы находить пищу, хватая ртом активную добычу, пока они копаются в опавших листьях и корнях растений. Они нюхают и фыркают, собирая пищу, и манипулируют добычей исключительно ртом, жевая с шумным щелчком челюстей. Ежики будут лизать или жевать незнакомые вещества или предметы и выделять обильную пенистую слюну, а затем наносить пену на свои шипы и между ними, а также на другие части тела. Значение такого поведения неизвестно.

Ежики живут поодиночке, терпят друг друга только во время ухаживания и совокупления и до тех пор, пока детеныши не станут достаточно взрослыми в возрасте четырех-семи недель, чтобы покинуть гнездо. В год бывает от одного до трех пометов от 1 до 11 потомков со сроком беременности от 31 до 42 дней. Птенцы слепы и беспомощны, у них при рождении рождаются мягкие разбросанные белые шипы, которые через три-пять дней заменяются более темными постоянными шипами. Западноевропейские ежи могут свернуться в клубок к 11 дням после рождения. Самки иногда съедают свое потомство, если гнездо потревожено вскоре после рождения, а самцы нападают и съедают молодых ежей того же вида.У них продолжительность жизни до семи лет.

Ежики обитают по всей Евразии к югу от тайги и тундры (за исключением Японии и Тибетского нагорья) в Малую Азию и Аравийский полуостров, большую часть Африки (за исключением тропических лесов) и различные части Индии. Западноевропейский ежик населяет опушки леса, луга, кустарники, живые изгороди и пригородные сады. Он также был завезен в Новую Зеландию. Пустынный еж ( Hemiechinus aethiopicus ) выживает в чрезвычайно засушливой Сахаре и на Аравийском полуострове, где популяции сосредоточены вокруг оазисов и заросших растительностью вади.

Ежики составляют подсемейство (Erinaceinae) семейства Erinaceidae, в которое также входят лунная крыса и гимнуры (подсемейство Galericinae) Юго-Восточной Азии и Филиппин. В более широком смысле название еж может применяться ко всем видам этого семейства. Ежики тесно связаны с гимнастикой. Вместе ежи и гимнасты составляют семейство Erinaceidae, единственное живущее семейство в отряде Erinaceomorpha. Эволюционная связь этого семейства с другими млекопитающими, в частности землеройками, соленодонами, кротами, золотыми кротами и тенреками, не выяснена.

Малый Ежик Тенрек | Зоопарк Юты Хогл

Диапазон:

Южный и юго-западный Мадагаскар.

Среда обитания:

Сухой лес, засушливые прибрежные районы и полупустыня

Характеристики:

Его колючая шерсть используется для отпугивания хищников и вибрирует для общения с другими тенреками. При угрозе меньший тенрек скатывается в шар, шипит и скрипит зубами. При укусе шипы впиваются в пасть и морду хищника.

Поведение:

Малые тенреки-ежи — один из 30 видов тенреков, обитающих на острове Мадагаскар. Эти мелкие млекопитающие приспособлены для выполнения роли мышей, ежей, землероек и опоссумов, обитающих в других частях мира. Этот вид обитает как на суше, так и на деревьях и ведет ночной образ жизни — дни спит, а ночи собирает пищу. В засушливые сезоны, когда пищи не хватает, он может стать вялым — состояние, при котором температура его тела падает, а метаболизм резко замедляется — это может длиться от трех до пяти месяцев, помогая сберегать энергию.

Размножение:

После примерно 49 дней беременности рождается помет от одного до десяти детенышей (обычно от пяти до семи). Детеныши весят всего около восьми граммов и становятся независимыми через 30-35 дней.

Интересные факты:

• При угрозе эти тенреки сворачиваются в клубок, оставляя открытыми только острые шипы — модифицированные волосы.
• Это зависит от его хорошего обоняния и слуха из-за плохого зрения.

Сохранение:

Хотя тенреки жили на Мадагаскаре около 60 миллионов лет, не исключено, что некоторые из них не доживут до нескольких десятилетий.Потеря среды обитания — самая большая угроза для этого и других видов тенреков.

	Знаете ли вы?
	Тенрек на малагасийском языке означает тандрака.

Ежики мира Архив

Этот вид ежей считается очень редким.Это вид ежа, который обитает в засушливых районах и джунглях на юго-востоке Индии.

В настоящее время мало что известно об этом виде ежа.

У ежей Брандта очень хорошо различимые черно-коричневые лицо и тело, а также большие уши. Этот вид ежей предпочитает для жизни сухие луга, пустыню или гористую местность.

В отличие от многих видов ежей, Еж Брандта ведет ночной образ жизни. Этот вид предпочитает засушливые пустынные районы и горы, скорее всего, в целях защиты.Часто использует естественные укрытия, но при необходимости роет норы или гнезда.

Фотография предоставлена ​​- Ежик Грейс

У этого вида очень разнообразная диета, в которую входят насекомые, лягушки, жабы и птичьи яйца. Они относительно быстрые животные, но не такие быстрые, как наши индийские длинноухие друзья!

Фотография предоставлена ​​- Ежик Грейс

Пустынный эфиопский еж — самый маленький член семейства ежей. Его самая отличительная особенность — контрастная темная морда и белая полоса на морде.

В отличие от других видов ежей, если пустынный еж чувствует угрозу, его мышцы напрягаются и натягивают внешний слой кожи вокруг его тела, заставляя его иглы
торчать во всех направлениях. Говорят, что поймать ежа из-за этого и из-за того, что у него длинные иглы, очень сложно.

Фотография предоставлена ​​- Ежик Грейс

Еж Хью предпочитает открытые участки сухой степи, но его можно найти прячущимся в живых изгородях и лесах. В отличие от многих других видов ежей, этот, как известно, ищет пищу даже днем ​​в дождливые дни.

Фотография предоставлена ​​- Ежик Грейс

Это еще один вид ежа с заметно большими ушами. Эти уши помогают ежам ощущать движения своей добычи, в том числе насекомых, мелких грызунов, мелких рептилий, птенцов и яиц.

Даурский еж предпочитает жить в зарослях кустарников и в скалах, которые, вероятно, служат для большей защиты и укрытия от хищников. Как и большинство видов ежей в регионах с умеренным климатом, даурская зимует в спячке.

Фотография предоставлена ​​- Ежик Грейс

Как и многие другие виды ежей, индийские длинноухие свиньи в основном следуют за своим превосходным слухом и обонянием, так как их зрение довольно плохое. К тому же они очень быстрые бегуны!

Индийский длинноухий ёжик часто обитает в норах. Будучи живущим в пустыне ежом, индийский длинноухий обычно получает воду из своего рациона, состоящего из мелких насекомых.

Индийские ежи в основном обитают в песчаных пустынных районах, но их можно встретить и в других местах.Хотя этот вид не впадает в спячку, он способен замедлять метаболизм при недостатке пищи.

Фотография предоставлена ​​- Ежик Грейс

Как и многие другие виды ежей, ушастые свиньи в основном следуют за своим превосходным слухом и обонянием, так как их зрение довольно плохое. К тому же они очень быстрые бегуны!

Большие уши этого ежа используются для теплового излучения в пустыне. У ушастого ежа низ живота светлого цвета и белые волоски на кончиках ушей.Знаете ли вы, что в отличие от многих своих противников, длинноухий еж с меньшей вероятностью свернется в клубок, когда к нему приблизится хищник, и предпочел бы попытаться убежать от него?

Фотография предоставлена ​​- Ежик Грейс

Южноафриканские ежи обитают в самых разных средах обитания, включая луга, скалистые участки, саванны и пригородные сады. Самая узнаваемая особенность этого вида ежа — белая полоса на лбу.

Южноафриканский ежик якобы медленно бродит, но может передвигаться на удивление быстро, когда чувствует угрозу.Южноафриканские ежи сталкиваются с опасностями, исходящими от
человек, и многие из них, к сожалению, погибают из-за автомобилей.

Фотография предоставлена ​​- Еж Грейс

Сомали — это вид саванн, и, как и большинство ежей, считается, что он обитает на лугах и в других открытых местах обитания.

У сомалийского ёжика иглы шоколадно-коричневого цвета с черными полосками. У него белый мех внизу живота и коричневый мех на спине.

Фотография предоставлена ​​- Ежик Грейс

Глипикан-6 способствует росту развивающихся длинных костей, стимулируя передачу сигналов ежа

J Cell Biol.4 сентября 2017 г .; 216 (9): 2911–2926.

Артикул

, ^{1, 2, *} , ^{1, 2, *} , ³ , ^{1, 2} , ^{1, 2} 1, ² , ^{1, 2} , ³ и ^{1, 2}

Мариана Капурро

¹ Исследовательский институт Саннибрук, Университет Торонто, Торонто, Канада,

² Департамент медицинской биофизики, Университет Торонто, Торонто, Онтарио, Канада

Томоми Изумикава

¹ Исследовательский институт Саннибрук, Университет Торонто, Торонто, Онтарио, Канада

² Департамент медицинской биофизики Университет Торонто, Торонто, Онтарио, Канада

Филипп Суарес

³ Центр молекулярных заболеваний, Университетская больница Лозанны, Лозанна, Швейцария

Вен Ши

90 166 1 Исследовательский институт Саннибрука, Университет Торонто, Торонто, Онтарио, Канада

² Кафедра медицинской биофизики, Университет Торонто, Торонто, Онтарио, Канада

Марзена Сидзик

¹ Исследовательский институт Саннибрукского университета Торонто, Торонто, Онтарио, Канада

² Кафедра медицинской биофизики, Университет Торонто, Торонто, Онтарио, Канада

Томоюки Канейва

¹ Исследовательский институт Саннибрука, Университет Торонто, Торонто, Онтарио

, Канада ² Кафедра медицинской биофизики, Университет Торонто, Торонто, Онтарио, Канада

Джин Гариепи

¹ Исследовательский институт Саннибрук, Университет Торонто, Торонто, Онтарио, Канада

² Кафедра медицинской биофизики, Университет of Toronto, Торонто, Онтарио, Канада

Луиза Бонафе

³ Центр по молекулярным заболеваниям, Университетская больница Лозанны, Лозанна, Швейцария

Хорхе Фильмус

¹ Исследовательский институт Саннибрук, Университет Торонто, Торонто, Онтарио, Канада

² Департамент медицинской биофизики, Университет Торонто, Торонто, Онтарио, Онтарио, Онтарио , Канада

¹ Исследовательский институт Саннибрук, Университет Торонто, Торонто, Онтарио, Канада

² Кафедра медицинской биофизики, Университет Торонто, Торонто, Онтарио, Канада

³ Центр молекулярных болезней, Лозанна Университетская больница, Лозанна, Швейцария

^* M.Капурро и Т. Изумикава внесли равный вклад в эту статью.

Поступила 30 мая 2016 г .; Пересмотрено 30 марта 2017 г .; Принято 15 июня 2017 г..

Эта статья распространяется на условиях лицензии с указанием авторства – Некоммерческое – Совместное использование – Без зеркальных сайтов в течение первых шести месяцев после даты публикации (см. Http://www.rupress.org/terms/) . По прошествии шести месяцев он станет доступен по лицензии Creative Commons (с указанием авторства – Некоммерческая – международная лицензия Share Alike 4.0, как описано по адресу https: // creativecommons.org / licenses / by-nc-sa / 4.0 /). Эту статью цитировали в других статьях PMC.

Abstract

Аутосомно-рецессивная омодисплазия (OMOD1) — это генетическое заболевание, характеризующееся низким ростом, укороченными конечностями и лицевым дисморфизмом. OMOD1 вызывается мутациями потери функции глипикана 6 ( GPC6 ). В этом исследовании мы показываем, что нулевых эмбрионов GPC6 обнаруживают большинство аномалий, обнаруживаемых у пациентов с OMOD1, и что передача сигналов Hedgehog (Hh) значительно снижена в длинных костях этих эмбрионов.Hh-стимулирующая активность GPC6 наблюдалась также в культивируемых клетках, где этот GPC увеличивал связывание Hh с Patched 1 (Ptc1). В соответствии с этим, GPC6 взаимодействует с Hh через свой коровой белок и с Ptc1 через свои гликозаминогликановые цепи. Передача сигналов Hh запускается в первичных ресничках. В отсутствие Hh мы наблюдали, что GPC6 локализуется вне реснички, но перемещается в ресничку после добавления Hh. Мы пришли к выводу, что GPC6 стимулирует передачу сигналов Hh за счет связывания с Hh и Ptc1 на ресничках и увеличения взаимодействия рецептора и лиганда.

Введение

Аутосомно-рецессивная омодисплазия (OMOD1) — это скелетная дисплазия, характеризующаяся низким ростом, сильно укороченными конечностями и черепно-лицевым дисморфизмом (Borochowitz et al., 1998; Elçioglu et al., 2004). Другие вариабельные аномалии включают крипторхизм, грыжи, врожденные пороки сердца и задержку когнитивных функций (Borochowitz et al., 1998; Elçioglu et al., 2004). OMOD1 был впервые описан в 1989 году, и его частота до сих пор неизвестна. Это генетическое заболевание вызвано мутациями потери функции глипикана 6 ( GPC6 ; Campos-Xavier et al., 2009). В соответствии с этим открытием, GPC6 экспрессируется в пролиферативной зоне пластинки роста костей мышей (Ahrens et al., 2009; Campos-Xavier et al., 2009).

GPC представляют собой семейство протеогликанов, которые связаны с плазматической мембраной через якорь гликозилфосфатидилинозитола. Шесть членов семейства GPC были идентифицированы у млекопитающих (от GPC1 до GPC6; Filmus et al., 2008; Filmus and Capurro, 2012). Структурные особенности, которые сохраняются во всем семействе, включают локализацию 14 остатков цистеина и домена, в который встроены цепи гликозаминогликана (GAG).Этот домен расположен рядом с С-концом, размещая цепи GAG вблизи поверхности клетки (Filmus et al., 2008). GPC отображают несколько сайтов присоединения GAG (от двух в GPC3 до четырех в GPC5 и GPC6). Функциональные последствия изменения количества цепей GAG до сих пор неизвестны. Было показано, что большинство GPC несут только цепи гепарансульфата (HS). Другой примечательной особенностью GPC является то, что они не отображают домены с очевидной гомологией с охарактеризованными доменами, обнаруженными в других белках, что позволяет предположить, что GPC имеют уникальные функции.

GPC регулируют сигнальную активность различных морфогенов / факторов роста, включая Hedgehogs (Hhs; Desbordes and Sanson, 2003; Lum et al., 2003; Wilson and Stoeckli, 2013), FGF (Hagihara et al., 2000; Yan and Lin, 2007), Wnts (Ohkawara et al., 2003; Song et al., 2005) и морфогенетические белки костей (Jackson et al., 1997; Akiyama et al., 2008; Taneja-Bageshwar and Gumienny, 2013). В большинстве случаев эта регуляторная активность основана на способности GPC либо ингибировать, либо стимулировать взаимодействие этих факторов роста с их сигнальными рецепторами.В настоящее время хорошо установлено, что структурные особенности GPC сочетаются с набором факторов роста и рецепторов факторов роста, присутствующих в данном типе клеток, для определения функции GPC.

Hhs представляют собой факторы роста / морфогены, которые играют критическую роль в формировании паттерна ткани во время эмбрионального развития и в сохранении гомеостаза у взрослых (Robbins et al., 2012; Briscoe and Thérond, 2013; Lee et al., 2016). У млекопитающих были идентифицированы три Hhs: Sonic Hh (Shh), Indian Hh (Ihh) и Desert Hh.В то время как Shh продуцируется многими тканями, экспрессия Ihh и Desert Hh ограничена несколькими типами клеток. Ihh — единственный Hh, обнаруживаемый в развивающейся кости (St-Jacques et al., 1999). Основным рецептором Hh на клеточной мембране является Patched 1 (Ptc1), трансмембранный белок из 12 частей. В отсутствие Hh Ptc1 подавляет активность Smoothened (Smo), другого трансмембранного белка. Стимуляция Hh отменяет ингибирование Smo с помощью Ptc1. Затем активированный Smo запускает сигнальный каскад, который индуцирует транскрипцию целевого гена через семейство факторов транскрипции Gli (Ryan and Chiang, 2012; Briscoe and Thérond, 2013).Хотя гены-мишени, которые регулируются передачей сигналов Hh, являются специфичными для клеточного типа, в целом этот сигнальный путь активирует экспрессию генов, которые играют критическую роль в клеточном цикле (т. Е. cyclin D1 ; Oliver et al., 2003) и в регуляции выживаемости клеток (т.е. Bcl-2 ; Bar et al., 2007). Кроме того, список генов-мишеней включает несколько компонентов пути Hh, таких как Gli1 и Ptc1 , что указывает на существование петель обратной связи.В соответствии с решающей ролью, которую Hhs играют в формировании паттерна ткани во время эмбрионального развития, мутации нескольких компонентов сигнального пути Hh вызывают различные врожденные заболевания, включая голопрозэнцефалию, брахидактилию и некоторые дисплазии костей (Zhang et al., 2006; Gao et al. , 2009). У позвоночных Hh связывается с Ptc1 в первичных ресничках (Rohatgi et al., 2007). Hh не может активировать сигнальную активность в клетках без этого придатка (Toftgård, 2009).

Длинные кости образуются в процессе развития в результате процесса, называемого эндохондральным окостенением, который начинается в пластинах роста, расположенных на концах костей.Зона ростовой пластинки, наиболее удаленная от фронта окостенения, населена покоящимися хондроцитами (Mackie et al., 2008). Рядом с зоной покоя находится пролиферативная зона, которая содержит клетки, которые активно пролиферируют, имеют уплощенную форму и упакованы в кластеры. Затем пролиферирующие хондроциты созревают в покоящиеся и увеличенные прегипертрофные хондроциты. Двигаясь к фронту окостенения, эти клетки становятся гипертрофическими хондроцитами, которые производят и откладывают внеклеточный матрикс, в который вторгаются кровеносные сосуды и предшественники остеобластов (Mackie et al., 2008; Карсенти и др., 2009).

Ihh, который продуцируется прегипертрофными клетками (St-Jacques et al., 1999; Long et al., 2001), стимулирует развитие клеточного цикла в пролиферативных клетках пластинки роста, которые экспрессируют Ptc1 (Long et al. ., 2001). Ключевая роль Ihh в росте костей подчеркивается поразительным фенотипом мышей Ihh -null, где все скелетные структуры существенно уменьшены в размерах (St-Jacques et al., 1999).

Способность GPC регулировать передачу сигналов Hh впервые была описана у Drosophila (Lum et al., 2003). У млекопитающих GPCs могут действовать как стимуляторы или ингибиторы передачи сигналов Hh (Filmus and Capurro, 2014). Было показано, что GPC5 и GPC1 действуют как позитивные регуляторы активности Hh (Li et al., 2011; Wilson and Stoeckli, 2013; Witt et al., 2013). GPC3, однако, действует как ингибитор Hh (Capurro et al., 2008). Мы показали, что GPC5 способствует связыванию Hh с Ptc1, и мы предположили, что эта стимулирующая активность обусловлена ​​тем фактом, что GPC5 может связываться как с Hh, так и с Ptc1 (Li et al., 2011).Напротив, GPC3 связывается с высоким сродством с Hh, но не взаимодействует с Ptc1 (Capurro et al., 2008). Связывание Hh с GPC3 запускает эндоцитоз и деградацию комплекса GPC3 / Hh (Capurro et al., 2008). Таким образом, GPC3 действует как ингибитор передачи сигналов, конкурируя с Ptc1 за связывание Hh (Capurro et al., 2008). Мутации с потерей функции GPC3 вызывают синдром избыточного роста Simpson-Golabi-Behmel (Pilia et al., 1996). Примечательно, что в отношении длины длинных костей эти пациенты обнаруживают фенотип, противоположный пациентам с OMOD1, но роль GPC6 в передаче сигналов Hh остается неизвестной.

Основываясь на способности нескольких GPC регулировать активность Hh и на том факте, что сигнальный путь Hh играет важную роль в стимулировании роста развивающейся кости путем стимуляции пролиферации хондроцитов, мы предположили, что GPC6 необходим для оптимальной активности Hh в развивающаяся кость, и что OMOD1 вызывается, по крайней мере частично, сниженной активностью Hh, вызванной недостатком GPC6. Здесь мы представляем генетические и биохимические данные, подтверждающие эту гипотезу. Кроме того, мы описываем важные особенности механизма, с помощью которого GPC6 стимулирует активность Hh.

Результаты

Характеристика GPC6-нулевых эмбрионов

О поколении GPC6--нулевых мышей сообщалось ранее (Tang et al., 2010). Единственная информация, предоставленная исследованием, заключалась в том, что мыши GPC6 -null демонстрируют эмбриональную летальность. Путем скрещивания GPC6 гетерозиготных мышей мы установили, что мыши, лишенные GPC6, умирают при рождении, так как мы обнаружили ожидаемую менделевскую частоту нокаутных (KO) эмбрионов на E17,5–18,5 (), но мы не идентифицировали ни одного живого новорожденного KO. мышей.

Таблица 1.

Генерация GPC6-нулевых мышей

Генотип	Количество мышей	Ожидаемая частота (%)	Наблюдаемая частота (%)
WT	WT	WT	25	21,5
Гетерозигота	91	50	51,4
KO	48	25	27,1

По сравнению с пометом WT17.5–18,5 GPC6 -нулевые зародыши значительно легче (). Напротив, GPC6 и гетерозиготных эмбрионов и эмбрионов WT имеют одинаковый вес. Окрашивание эмбрионов E17.5 альциановым синим / ализариновым красным показало, что длинные кости нулевых эмбрионов GPC6 короче, чем у однопометников WT (и). Кроме того, наличие красного окрашивания указывает на то, что, в отличие от мышей Ihh -null (St-Jacques et al., 1999), кости в КО GPC6 подвергаются дифференцировке / окостенению.Это согласуется с наблюдением, что GPC6 не экспрессируется в надхрящнице, которая играет критическую роль в оссификации, процессе, который регулируется Ihh (Long et al., 2001). Клетки надхрящницы дифференцируются в остеобласты, которые производят минерализованный матрикс, необходимый для образования кости. Примечательно, что фенотип длинных костей мышей GPC6 -null на макроскопическом уровне, по-видимому, подобен фенотипу хрящевых мышей Smo -KO. У этих мышей путь Hh был инактивирован в пластинке роста, но все еще активен в надхрящнице (Long et al., 2001). Окрашивание эмбрионов альциановым синим / ализариновым красным также показало, что мыши GPC6 -null имеют меньшие череп и морду, а также нормальный позвоночник ().

GPC6 -null мыши демонстрируют уменьшенный размер тела и аномалии костей. (A, вверху) Относительный вес эмбрионов E17.5 – E18.5 указанного генотипа (WT, гетерозиготные [Het] и KO). Среднему весу дикого животного в каждом помете произвольно присвоили значение 1. Столбцы представляют собой средний относительный вес + SEM. n = 38, 79 и 42 для GPC6 WT, гетерозиготных и KO соответственно. Статистический анализ проводили с помощью теста Стьюдента t (непарный двусторонний). (Внизу) Представление данных точечной диаграммой. (B) Окрашивание альциановым синим – ализариновым красным эмбрионов E17.5 указанных генотипов.

GPC6-нулевые мыши демонстрируют более короткие длинные кости и дисморфизм лица. (A) Целые бедренные кости вырезали из эмбрионов E17.5 или E15.5 указанных генотипов.Изображения получали с помощью камеры (DFC 295; Leica) с использованием стереоскопа (M60; Leica), а длину бедренной кости измеряли с помощью Leica Application Suite (V3.8). Показаны диаграммы разброса со средним значением ± SEM для восьми WT и семи эмбрионов KO. Средней длине бедренной кости WT в каждом помете произвольно присвоили значение 1. (B, вверху). Верхние конечности были вырезаны из эмбрионов GPC6 WT и GPC6 KO E18.5 и окрашены альциановым синим – ализариновым красным. Изображения были получены камерой (DFC 295) с использованием стереоскопа (M60).Показаны типичные кости. (Внизу) Изображения трех бедренных костей WT и трех KO из разных пометов были измерены с помощью Leica Application Suite (V3.8). На графике показаны графики разброса со средним значением ± SEM. (C) Проксимальный метафиз бедренной кости у эмбрионов E17.5 указанных генотипов окрашивали гематоксилином / эозином и снимали под микроскопом. Вставки представляют собой увеличенное в восемь раз изображение с низким увеличением. Прутки, 100 мкм. (D) Указанные кости были вырезаны из GPC6 WT ( n = 6) и GPC6 KO ( n = 6) E18.5 эмбрионов и окрашены альциановым синим – ализариновым красным. Были получены изображения, и длина диафиза была измерена, как в B. На графике показаны диаграммы разброса со средним значением ± стандартная ошибка среднего. Средней длине костей WT в каждом помете произвольно присвоили значение 1. (E, слева). Репрезентативные сагиттальные срезы головы, соответствующие E18.5 GPC6 WT и GPC6 KO эмбрионов. (Справа) Длину черепа от основания черепа до конца носовой полости измеряли у GPC6 WT ( n = 6) и KO ( n = 6) эмбрионов.Результаты представлены в виде диаграммы разброса со средним значением ± стандартная ошибка среднего. Средней длине черепа дикого типа в каждом помете было произвольно присвоено значение 1. (F и G) Репрезентативные поперечные сечения черепа эмбрионов E18.5 указанных генотипов, иллюстрирующие небный шизис (стрелка и круг; F) и аплазия носовой перегородки. (кружки; G) наблюдали у мышей GPC6 -null со 100% пенетрантностью ( n = 5 каждого генотипа). Статистический анализ проводился с помощью тестов Стьюдента t (непарные двусторонние).

Затем мы измерили длину бедренных костей на E17,5 и E15,5. Мы обнаружили, что эти кости значительно короче у эмбрионов GPC6 -null (). Мы также сравнили длину костей верхних конечностей. Во всех случаях кости эмбрионов с нулевым GPC6 были значительно короче, чем кости эмбрионов WT (). Фактически, по сравнению с наблюдаемой разницей в массе тела конечности мышей GPC6 -null были непропорционально меньше. Эти результаты согласуются с фенотипом пациентов с OMOD1.Были приготовлены срезы тканей бедренной кости, окрашены толуидиновым синим и исследованы под микроскопом. Мы обнаружили, что хондроциты в пролиферативной зоне ростовой пластинки были дезорганизованы, и им не хватало типичного стекирования клеток в столбцы (). Этот фенотип имел 100% пенетрантность. Сходная дезорганизация пластинки роста описана у мышей Ihh -null (Koziel et al., 2005). Мы также сравнили длину диафиза бедренных, большеберцовых и малоберцовых костей E17.5.Мы обнаружили, что уменьшение длины диафиза у GPC6 -нулевых эмбрионов было даже более выраженным, чем у целых костей ().

Еще одним заметным анатомическим различием между нулевыми мышами GPC6 и нормальными однопометниками был размер черепа, который был значительно меньше у нокаутов (). Мы также обнаружили, что у мышей GPC6 -null наблюдается расщелина неба () и аплазия носовой перегородки () со 100% пенетрантностью. Позвоночник и конечности были в норме, как у пациентов с OMOD1.Следует отметить, что GPC6 играет роль в формировании возбуждающих синапсов (Allen et al., 2012), но на данный момент причина преждевременной смерти мышей GPC6 -null остается неизвестной.

Оценка передачи сигналов Hh и пролиферации клеток в бедренной кости GPC6-нулевых эмбрионов

Для сравнения степени активации пути передачи сигналов Hh у мышей WT и KO мы оценили уровни Ptc1 и Gli1 в эмбриональных бедрах. Хорошо известно, что Ptc1 и Gli1 являются мишенями транскрипции сигнального пути Hh (Ingham et al., 2011). Были получены бедренные кости от 15,5-дневных эмбрионов, и уровни мРНК Ptc1 и Gli1 были измерены с помощью ОТ-ПЦР в реальном времени, как описано ранее (Capurro et al., 2008). Мы обнаружили, что уровни транскриптов Ptc1 и Gli1 значительно ниже у мышей GPC6 -null по сравнению с нормальными однопометниками (). Из этих результатов мы заключаем, что GPC6 стимулирует передачу сигналов Hh в развивающейся кости. Следует отметить, что, как и мыши GPC6 -null, мыши Ihh -null также имеют более короткие длинные кости.Однако фенотип длинных костей у мышей Ihh -null более серьезен, чем у мутантов GPC6 . Вероятно, это связано с тем, что GPC6 стимулирует передачу сигналов Hh, но это не важно для активности Hh. Кроме того, в отличие от GPC6, Ihh сигнальный рецептор Ptc1 экспрессируется в надхрящнице (St-Jacques et al., 1999). Таким образом, помимо демонстрации сниженной пролиферации хондроцитов, мыши Ihh -null демонстрируют недостаточное развитие остеобластов (St-Jacques et al., 1999).

GPC6 -нулевые бедренные кости демонстрируют снижение передачи сигналов Hh и пролиферацию хондроцитов. (A) Сравнение уровней Ptc1 и Gli1 в бедренной кости E15.5. Транскрипты Ptc1 и Gli1 измеряли с помощью ОТ-ПЦР в реальном времени, используя уровни транскриптов β-актина в качестве эталонов. Всего было проанализировано шесть бедренных костей GPC6 WT и шесть GPC6 -null (KO) из четырех пометов эмбрионов E15.5. Среднее значение WT для каждого помета было условно принято за 1, и были рассчитаны относительные уровни экспрессии КО.Диаграммы разброса показывают среднее значение + SEM. (B) Иммуногистохимический анализ Ihh в срезах бедренной кости E15.5. Окрашивание проводили на трех однопометных парах КО и WT-эмбрионов и одной паре КО и гетерозиготных эмбрионов из трех разных пометов. Показан репрезентативный результат. Прутки, 100 мкм. (C) Индекс мечения BrdU пластинок роста из срезов бедренной кости, выделенных из эмбрионов E15.5. Результаты представляют собой среднее значение + SEM пар мышей WT и KO из трех разных пометов. Средний процент срезов WT был определен как 1.Подсчитывали все ядра в каждом отделе бедренной кости (от 370 до 650 ядер). Диаграммы разброса показывают среднее значение ± SEM. (D) Иммуногистохимический анализ Ki67 в срезах пластины роста бедренной кости E15.5. Был рассчитан процент положительных клеток. Результаты представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего для пар мышей WT и KO из трех разных пометов. Подсчитывали все ядра в каждом отделе бедренной кости (от 370 до 650 ядер). Средний процент срезов WT был определен как 1. Диаграммы разброса показывают среднее значение ± SEM. (E) Иммуногистохимический анализ циклина D1 в E15.5 секций пластины роста бедренной кости. Окрашивание проводили на трех парах эмбрионов KO и WT из трех разных пометов. (Слева) Показан типичный результат. Прутки, 50 мкм. (Справа) Рассчитан процент положительных клеток. Результаты представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего для пар мышей WT и KO из трех разных пометов. Подсчитывали все ядра в каждом отделе бедренной кости (от 370 до 650 ядер). Средний процент срезов дикого типа был определен как 1. Статистический анализ выполняли с помощью теста Стьюдента t (непарный двусторонний).

HS протеогликаны могут играть роль в секреции Hh (Hilton et al., 2005; Bandari et al., 2015). Таким образом, можно предположить, что костный фенотип мышей GPC6 -null вызван изменениями уровней и / или внеклеточного распределения Ihh. Однако иммуноокрашивание и вестерн-блоттинг пластинки роста бедренной кости показали, что уровни экспрессии и распределение Ihh в эмбрионах GPC6 -null E17.5 были аналогичны таковым у однопометников дикого типа (и рис.S1). Это согласуется с тем фактом, что GPC6 не экспрессируется в прегипертрофной зоне, которая является областью, где секретируется Ihh (Campos-Xavier et al., 2009).

Ihh — сильный стимулятор пролиферации хондроцитов во время развития длинных костей (Long et al., 2001). На основании этого мы предположили, что хондроциты из ростовых пластин мышей GPC6 -null должны демонстрировать пониженную пролиферацию. Чтобы проверить эту гипотезу, мы сравнили индекс мечения BrdU в срезах пластинки роста бедренной кости от мутантных мышей и нормальных однопометников.Как показано в, мы обнаружили, что этот индекс значительно меньше в бедренной кости GPC6 -null. Мы также оценили пролиферацию клеток в пластинке роста путем окрашивания срезов ткани антителом против Ki67. В соответствии с результатами для индекса маркировки BrdU мы обнаружили, что ростовые пластины бедренной кости GPC6 -null показывают относительно значительно более низкий процент Ki67-положительных клеток ().

Помимо пониженного индекса BrdU, хондроциты из нулевого Ihh также обнаруживают более низкие уровни циклина D1, гена-мишени передачи сигнала Hh, экспрессия которого регулируется митогенами (Long et al., 2001). Таким образом, мы оценили относительные уровни циклина D1 в срезах пластинок роста бедренных костей, полученных от нулевых эмбрионов GPC6 и нормальных однопометников, путем иммуноокрашивания антителом к ​​циклину D1. Как и ожидалось, было обнаружено, что уровни циклина D1 значительно снижены в мутантных пластинах для роста ().

Мы ранее получили генетические доказательства, демонстрирующие, что путь Hh опосредует рост ингибирующего эффекта GPC3 путем скрещивания GPC3 гетерозиготных и Ihh гетерозиготных мышей (Capurro et al., 2009). Следуя аналогичному подходу, мы проверили гипотезу о том, что GPC6-индуцированная стимуляция пролиферации хондроцитов в развивающейся кости опосредуется, по крайней мере частично, сигнальным путем Hh. С этой целью сначала скрещивали гетерозиготных мышей GPC6 и Ihh для получения двойных гетерозигот. Следует отметить, что GPC6 гетерозиготных () и Ihh гетерозиготных мышей (Long et al., 2006) имеют нормальный размер и что Ihh KO мышей значительно меньше нормальных мышей (St-Jacques et al., 1999). Затем были выведены двойные гетерозиготные мыши, и каждый эмбрион E17.5 из каждого помета, полученного в результате разведения, был генотипирован и взвешен. Кроме того, у некоторых из них мы рассекли бедренные кости и измерили длину костей. Если, согласно нашей гипотезе, GPC6 регулирует рост длинных костей путем стимуляции пути Ihh, можно ожидать, что GPC6 / Ihh двойных гетерозигот будут меньше и будут иметь более короткие длинные кости, чем GPC6 или Ihh одиночных гетерозигот. что гетерозиготы GPC6 KO / Ihh будут меньше и отображать более короткие длинные кости, чем GPC6 KO / Ihh WT, и что эмбрионы с двойным KO не будут ни меньше, ни иметь более короткие длинные кости, чем . Ihh KO / GPC6 WT эмбрионов.Однако, если GPC6 регулирует рост длинных костей независимо от пути Ihh, можно ожидать, что эмбрионы с двойным KO будут демонстрировать большее уменьшение массы тела и длины длинных костей, чем наблюдаемое при каждом одиночном KO.

Результаты, представленные в, согласуются с нашей гипотезой, поскольку двуногетерозиготные эмбрионы значительно меньше () и имеют более короткие бедренные кости (), чем нормальные однопометники, а гетерозиготные эмбрионы GPC6 KO / Ihh значительно меньше и меньше и имеют более короткие бедренные кости (). отображают более короткие бедренные кости, чем GPC6 KO / Ihh WT.Кроме того, эмбрионы с двойным КО и эмбрионы GPC6 гетерозиготные / Ihh КО имеют такой же вес и длину бедренной кости, что и эмбрионы GPC6 WT / Ihh KO (). Таким образом, эти результаты обеспечивают сильную генетическую поддержку гипотезы о том, что путь Ihh опосредует стимулирующий рост эффект GPC6 в костях.

Генетическое взаимодействие между GPC6 и сигнальным путем Hh. (A) GPC6 / Ihh Были выведены двойных гетерозиготных мышей, и все мыши E17.Взвешивали и генотипировали по 5 эмбрионов из каждого помета. Чтобы иметь возможность сравнивать эмбрионы из разных пометов, вес эмбрионов в данном помете был нормализован на средний вес WT-эмбрионов, которому произвольно было присвоено значение 1. Столбцы представляют собой средний вес + SEM для указанных генотипов. Первая полоса справа включает мышей с тремя разными генотипами, которые имеют нормальный вес: GPC6 ^{+ / +} Ihh ^{+ / +} , GPC6 ^+/– Ihh ^{+ / +} и . GPC6 ^{+ / +} Ihh ^+/− .Цифры на столбиках представляют количество эмбрионов, взвешенных для каждого генотипа. (B) Бедренные кости из некоторых пометов, полученных в результате разведения мышей с двойной гетерозиготностью GPC6 / Ihh , вскрывали и измеряли их длину, как описано в. Показаны точечные диаграммы со средним значением ± SEM для указанного количества эмбрионов. Средней длине бедренной кости дикого типа в каждом помете произвольно присвоили значение 1. Статистический анализ выполняли с помощью теста Стьюдента t (непарный двусторонний).

Характеристика хондроцит-специфичных

GPC6 -нулевых мышей

Чтобы полностью исключить возможность того, что костный фенотип, наблюдаемый у GPC6-нулевых мышей, вызван, по крайней мере частично, косвенным эффектом отсутствия GPC6 в В других тканях / органах во время развития были получены хондроцит-специфичные мыши GPC6 -null. С этой целью мы скрестили линию мышей, несущих floxed аллель GPC6 , со штаммом, несущим ген Cre под транскрипционным контролем промотора Col2α1.Этот подход ранее использовался для создания хондроцит-специфичных штаммов Ihh-null и Smo -null (Long et al., 2001; Razzaque et al., 2005). Мыши, несущие специфичную для хондроцитов делецию GPC6 (Col2α1Cre; GPC6 ^d / GPC6 ^d ), родились с ожидаемой менделевской частотой. У новорожденных мутантов укорачивание длинных костей было незначительным. Однако к P15 стало очевидным существенное различие в длине длинных костей WT и мутантных длинных костей. Затем мышей P21 умерщвляли, иссекали бедренные и большеберцовые кости и измеряли их длину.Как показано на фиг.1, эти измерения подтвердили, что Col2α1 Cre ; У мышей GPC6 ^d / GPC6 ^d длинные кости значительно короче, чем у их нормальных однопометников (). Выполнив ОТ-ПЦР в реальном времени, мы подтвердили, что экспрессия GPC6 была резко снижена в мутантном штамме (). Срезы тканей мутировавших пластинок роста окрашивали толуидиновым синим и исследовали под микроскопом. Подобно тому, что наблюдалось в глобальном штамме GPC6 -null, зоны пролиферации в пластинах роста тканеспецифичных мутантов имели неорганизованную структуру.Также наблюдался явный лицевой дисморфизм (не изображен). Скорее всего, задержка проявления костного фенотипа у хондроцит-специфичных мутантов по сравнению с глобальными мутантами происходит из-за неполной и / или отсроченной делеции floxed GPC6 .

Chondrocyte-specific GPC6 -null мыши демонстрируют более короткие длинные кости. (слева) бедренные и большеберцовые кости мышей WT и GPC6 -null (KO) P21 препарировали и измеряли их длину, как описано в.Всего было исследовано пять мышей WT и шесть мышей KO, происходящих из четырех разных пометов. Показаны диаграммы разброса со средним значением ± стандартная ошибка среднего. Средней длине бедренной кости дикого типа в каждом помете произвольно присвоили значение 1. (Справа) РНК экстрагировали из измеренных костей, а уровни GPC6 оценивали с помощью ОТ-ПЦР в реальном времени. Столбцы представляют собой среднее значение + SEM. Среднему значению WT в каждом помете произвольно присвоили значение 1. Статистический анализ выполняли с помощью теста Стьюдента t (непарный двусторонний).

Влияние GPC6 на передачу сигналов Hh

Чтобы изучить механизм, с помощью которого GPC6 стимулирует передачу сигналов Hh, мы сначала проверили влияние GPC6 на активность Hh в клетках NIH 3T3, выполнив анализ репортера люциферазы, в котором экспрессия люциферазы вызывалась Hh-отзывчивый промоутер. Как показано на фиг. S2, этот анализ показал, что GPC6 сильно стимулирует ShhN (N-концевой домен Shh) и активность полностью зрелого Shh дозозависимым образом. В качестве контроля мы показали, что в том же анализе GPC3 проявляет Hh-ингибирующую активность (), как мы и другие ранее сообщали (Capurro et al., 2008; Williams et al., 2010). Следовательно, этот результат предоставляет дополнительные доказательства, указывающие, что GPC6 стимулирует передачу сигналов Hh.

GPC6 стимулирует путь передачи сигналов Hh. (A) Репортерный анализ Hh. Клетки NIh4T3 трансфицировали GPC6 (слева) или GPC3 (справа) или векторным контролем (промотор цитомегаловируса [pCMV] и промотор фактора элонгации [EF]) вместе с репортером люциферазы, управляемым Hh-чувствительным промотором и β-галактозидазой. Трансфицированные клетки стимулировали в течение 48 ч средой, кондиционированной ShhN или контролем.Затем были выполнены анализы люциферазы и β-галактозидазы. Столбцы представляют собой кратную стимуляцию активности люциферазы, индуцированную Hh (среднее значение + SEM для трех повторов), нормализованную по активности β-галактозидазы. Показан один репрезентативный эксперимент из четырех. (B) Повышенное связывание Shh с Ptc1 в присутствии GPC6. Клетки NIh4T3, экспрессирующие возрастающие количества GPC3 или GPC6, инкубировали в течение 2,5 ч при 4 ° C с Shh-AP или AP. Затем Ptc1 подвергали иммунопреципитации и определяли количество Shh, связанного с иммунопреципитированным Ptc1, путем измерения активности AP.Столбцы представляют собой относительное количество Shh-AP, связанного с Ptc1 (среднее + стандартная ошибка среднего из четырех независимых экспериментов) после вычитания связывания, измеренного для одного AP. Связывание Shh-AP с клетками, трансфицированными векторным контролем, было произвольно рассмотрено 1. (C) HS-цепи необходимы для максимальной GPC6-индуцированной стимуляции передачи сигналов Hh. Клетки NIh4T3 трансфицировали возрастающими количествами указанных экспрессионных векторов вместе с репортером люциферазы, управляемым Hh-чувствительным промотором и β-галактозидазой.Затем определяли активность люциферазы в присутствии и в отсутствие Shh, как описано в A. Столбцы представляют собой кратную стимуляцию активности люциферазы, индуцированную Hh (среднее значение + SEM для трех повторов), нормализованную по активности β-галактозидазы. Показан один репрезентативный эксперимент из двух. *, P <0,05; **, P <0,005; ***, P <0,001. Статистический анализ проводили с помощью теста Стьюдента t (непарный двусторонний).

Затем мы попытались раскрыть механизм, с помощью которого GPC6 стимулирует передачу сигналов Hh.Ранее мы продемонстрировали, что GPC5 увеличивает активность Shh, способствуя связыванию Shh с Ptc1 (Li et al., 2011). Поэтому мы решили исследовать влияние GPC6 на взаимодействие этих двух белков. С этой целью мы следовали той же экспериментальной схеме, что и тот, который мы использовали для изучения эффекта GPC5 на взаимодействие Shh и Ptc1 (Li et al., 2011). Клетки NIH 3T3 трансфицировали различными количествами GPC6, и через 2 дня после трансфекции клетки инкубировали со слитым белком Shh-AP.Затем клетки лизировали, Ptc1 иммунопреципитировали и измеряли уровни Shh-AP, коиммунопреципитировавшиеся с Ptc1. Как показано в, мы обнаружили, что GPC6 значительно стимулирует связывание Shh с Ptc1 дозозависимым образом. Следует отметить, что в этом экспериментальном протоколе эффект GPC6, скорее всего, недооценен, поскольку только часть (15-20%) клеток поглощает трансфицированную кДНК GPC6, тогда как Ptc1 иммунопреципитируется из всех клеток в пластина. В качестве контроля мы параллельно проводили аналогичный эксперимент с GPC3.Как сообщалось ранее, мы наблюдали, что этот GPC ингибирует взаимодействие Shh с Ptc1 (Capurro et al., 2008).

цепей GAG необходимы для GPC5-индуцированной стимуляции передачи сигналов Hh в клетках NIh4T3 (Li et al., 2011). Поэтому мы исследовали, необходимы ли цепи GAG также для индуцированной GPC6 стимуляции передачи сигналов Hh. С этой целью мы создали мутант GPC6, в котором четыре сайта присоединения для цепей GAG были мутированы (GPC6ΔGAG), и протестировали влияние этого мутанта на анализ репортера люциферазы Hh в клетках NIH 3T3.Мы обнаружили, что негликанированный GPC6 имел небольшой стимулирующий эффект на передачу сигналов Hh, который можно было увидеть только при трансфекции больших количеств этого мутанта (). Этот результат предполагает, что цепи GAG играют ключевую роль в активности GPC6. Кроме того, этот результат указывает на то, что механизм, с помощью которого GPC6 стимулирует передачу сигналов Hh, несколько отличается от механизма GPC5, поскольку Hh-стимулирующая активность GPC5 полностью аннулируется в отсутствие цепей GAG (Li et al., 2011).

Анализ взаимодействия GPC6 с Shh, Ihh и Ptc1

Затем мы исследовали механизм, с помощью которого GPC6 стимулирует связывание Hh с Ptc1.Мы предположили, что GPC6 может облегчить / стабилизировать взаимодействие Hh с Ptc1. Если бы эта гипотеза была верной, можно было бы ожидать, что GPC6 взаимодействует как с Hh, так и с Ptc1. Во-первых, мы исследовали, взаимодействует ли GPC6 с Shh с помощью анализа поверхностного плазмонного резонанса (SPR). Слитый белок GPC6-AP (GPC6-AP) очищали от клеток 293T и иммобилизовали на сенсорном чипе для измерения его связывания с рекомбинантными Shh и Ihh. Было показано, что GPC6-AP связывается с Shh и Ihh с сопоставимыми наномолярными константами диссоциации (K _D ’s; 12 ± 3 нМ и 14 ± 2 нМ, соответственно;).Мы также исследовали роль основного белка во взаимодействии GPC6 / Hh. С этой целью мы выполнили SPR-анализ с негликанированным мутантом GPC6ΔGAG. Мы обнаружили, что и Shh, и Ihh связываются с этим мутантом со сродством, относительно аналогичным наблюдаемому для гликанированного GPC6 (K _D 21 ± 2 нМ для Shh и 16 ± 4 нМ для Ihh;), что указывает на то, что коровый белок GPC6 является основным медиатором взаимодействия GPC6 / Hh. Однако эти результаты не исключают возможность того, что цепи GAG GPC6 также взаимодействуют с Shh и Ihh.

GPC6 взаимодействует с Shh, Ihh и Ptc1. (A) SPR-анализ взаимодействия Shh и Ihh с GPC6-AP и GPC6ΔGAG-AP. Очищенные GPC6-AP и GPC6ΔGAG-AP были биотинилированы, а затем иммобилизованы на сенсорных чипах SA (GPC6, 1300 относительных единиц [RU]; GPC6ΔGAG, 700 RU). Для определения профиля связывания вводили различные концентрации рекомбинантных Shh или Ihh (от 62,5 до 1000 нМ). Этот эксперимент повторяли три раза, и показанные результаты представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего.(B) Анализ GPC6 / Ptc1 pull-down. Взаимодействие между Ptc1 и GPC6-AP или GPC6ΔGAG-AP определяли методом анализа с понижением уровня. Гранулы, покрытые Ptc1, инкубировали с GPC6-AP–, GPC6ΔGAG-AP– или средой, кондиционированной векторным контролем. Столбцы представляют собой среднее значение трех повторов + стандартное отклонение. Эксперимент был повторен трижды с аналогичными результатами. Показан репрезентативный эксперимент. (C) Анализ связывания клеток GPC6 / Ptc1. Клетки 293T трансфицировали вектором экспрессии Ptc1 или векторным контролем. Трансфицированные клетки инкубировали с GPC6-AP–, GPC6ΔGAG-AP– или АР-кондиционированной средой, содержащей равные концентрации АР, в течение 2 ч при 4 ° C.Клетки промывали и лизировали, и измеряли активность АР аликвот клеточных лизатов, содержащих такое же количество белка. Столбцы представляют собой среднее значение трех повторов + стандартное отклонение. Эксперимент был повторен четыре раза с аналогичными результатами.

В свете того факта, что Ptc1 не может быть очищен, мы выполнили анализ с понижением уровня для исследования взаимодействия GPC6 и мутанта GPC6ΔGAG с Ptc1. Ранее мы использовали этот подход для оценки взаимодействия GPC3 и GPC5 с Ptc1 (Capurro et al., 2008; Ли и др., 2011). Клетки 293T временно трансфицировали вектором экспрессии для Ptc1, меченного гемагглютинином A (HA), и затем клеточные лизаты смешивали с шариками, покрытыми анти-HA антителом. Затем шарики инкубировали с кондиционированной средой, содержащей равные концентрации слитого белка GPC6-AP или слитого белка GPC6ΔGAG-AP. После промывки измеряли количество ферментативной активности АР, которая осталась связанной с шариками. Мы обнаружили, что, хотя было значительное связывание WT GPC6, мутант GPC6ΔGAG не обнаруживал какого-либо детектируемого связывания ().Этот результат указывает на то, что GPC6 взаимодействует прямо или косвенно с Ptc1 через цепи GAG.

В качестве дополнительного подхода к оценке взаимодействия GPC6 / Ptc1 мы выполнили анализ связывания клеток. С этой целью клетки 293T трансфецировали Ptc1 или контрольным вектором и инкубировали со слитым белком GPC6-AP или слитым белком GPC6ΔGAG-AP в течение 2 часов. После обширной промывки клетки лизировали и измеряли активность АР, которая оставалась связанной с клеточными лизатами. В соответствии с результатами анализа мы обнаружили значительное связывание WT GPC6 с клетками, трансфицированными Ptc1.Связывание было резко снижено для негликанированного мутанта ().

Локализация GPC6

В настоящее время хорошо установлено, что передача сигналов Hh запускается в первичных ресничках и что взаимодействие между Hh и Ptc1 может происходить на мембране ресничек (Rohatgi et al., 2007). Следовательно, мы пришли к выводу, что если GPC6 действует, чтобы облегчить и / или стабилизировать взаимодействие Hh / Ptch2, этот GPC д. Обнаруживаться на цилиарной мембране. Чтобы определить локализацию GPC6, мы трансфицировали клетки NIH 3T3 GPC6 или GPC6ΔGAG и окрашивали трансфицированные клетки антителами против GPC6 и ацетилированным тубулином, маркером первичной реснички ().Удивительно, но мы не смогли обнаружить GPC6 в ресничке. Однако, когда трансфицированные клетки инкубировали с Shh в течение 1 ч при 37 ° C, большинство клеток, экспрессирующих GPC6, отображали GPC6 в своих ресничках (). Этот результат убедительно указывает на то, что Shh индуцирует миграцию GPC6 в реснички. Напротив, мутант GPC6ΔGAG не перемещался в ресничку после инкубации с Shh (). Кроме того, мы заметили, что окрашивание GPC6 в обработанных Shh клетках было точечным, тогда как картина окрашивания в необработанных клетках или в клетках, трансфицированных GPC6ΔGAG, была более диффузной.Затем мы количественно оценили флуоресценцию, генерируемую цилиарным GPC6 в клетках, инкубированных с Shh в течение различных периодов времени. Как показано в, мы обнаружили, что GPC6 может быть обнаружен в ресничках уже через 30 мин после добавления Shh и что он очень быстро мигрирует от цилиарной мембраны, достигая фоновых уровней через 4 часа. Однако GPC6ΔGAG не был обнаружен в ресничках ни в одной из исследованных временных точек.

Shh индуцирует миграцию GPC6 в реснички. (A) Клетки NIH 3T3 трансфицировали GPC6 или GPC6ΔGAG и обрабатывали Shh-кондиционированной средой или средой, кондиционированной векторным контролем, в течение 1 часа.Затем клетки иммуноокрашивали антителами к GPC6 (красный) и ацетилированный тубулин (зеленый). Прямоугольники в углах представляют собой сдвинутые наложения увеличений указанных областей, содержащих реснички. (B) Иммунофлуоресценцию GPC6 или GPC6ΔGAG на ресничках трансфицированных клеток NIH 3T3 измеряли до и после обработки Shh в течение указанных периодов времени. Показанные интенсивности флуоресценции представляют собой среднее значение измерений, проведенных в следующем количестве клеток, трансфицированных GPC6 / GPC6ΔGAG: 30/25 (0 ч), 22/11 (0.5 ч), 30/25 (1 ч), 39/10 (2 ч), 10/26 (4 ч) и 22/20 (8 ч) ± стандартное отклонение. Для статистического анализа применялся двусторонний критерий Стьюдента t . *, P <0,005 (достоверно отличается).

Сообщалось, что в отсутствие Hh, Ptc1 обычно обнаруживается в цилиарной мембране и что он перемещается из ресничек после обработки Shh (Rohatgi et al., 2007). Smo демонстрирует противоположное поведение (Rohatgi et al., 2007). Во-первых, мы исследовали влияние GPC6 на Shh-индуцированную миграцию Smo к ресничкам.Трансфицированные клетки окрашивали в разные моменты времени после добавления Shh с антителами против ацетилированного тубулина и Smo. Мы наблюдали, что GPC6 стимулировал накопление Smo в этом придатке (). Эти изменения не наблюдались при трансфекции клеток GPC6ΔGAG. Мы также попытались изучить влияние GPC6 на удаление Ptc1 из ресничек. Однако с использованием коммерчески доступных антител обнаружение Ptc1 было недостаточно надежным для точной количественной оценки.

GPC6 стимулирует миграцию Smo к ресничкам после обработки Shh. (A) Клетки NIH 3T3 трансфицировали GPC6, GPC6ΔGAG или векторным контролем. Трансфицированные клетки обрабатывали Shh в течение указанных периодов времени, и клетки окрашивали антителами против Smo и ацетилированного тубулина. Показанные интенсивности флуоресценции представляют собой среднее значение измерений, проведенных в следующем количестве клеток, трансфицированных вектором / GPC6 / GPC6ΔGAG: 23/29/23 (0 часов), 27/26/19 (1 час), 26/26/28 ( 2 ч) и 26/37/22 (4 ч) ± стандартное отклонение. *, P <0,01 (достоверно отличается). (B) Клетки NIH 3T3 трансфицировали GPC6 или GPC6ΔGAG.Трансфицированные клетки обрабатывали SAG в течение указанных периодов времени, и клетки окрашивали антителами против GPC6 и ацетилированного тубулина. Показанные интенсивности флуоресценции представляют собой среднее значение измерений, проведенных в следующем количестве клеток, трансфицированных GPC6 / GPC6ΔGAG: 9/7 (0 часов), 15/15 (0,5 часа), 11/11 (2 часа) и 10/10. (4 ч) ± стандартное отклонение. Для статистического анализа применялись двусторонние критерии Стьюдента t .

В принципе, Shh-индуцированная миграция GPC6 в реснички может быть прямым следствием связывания Shh с GPC6 или может представлять косвенное следствие активации пути передачи сигналов Hh.Чтобы различать эти две возможности, мы исследовали влияние обработки клеток, трансфицированных GPC6, агонистом Smo (SAG), небольшой молекулой, которая активирует передачу сигналов Hh путем связывания с Smo. Как показано в, мы обнаружили, что обработка SAG не может индуцировать миграцию GPC6 в ресничную мембрану, подтверждая, что миграция этого GPC в ресничку является прямым следствием его взаимодействия с Shh.

Наконец, мы исследовали, может ли Shh индуцировать миграцию эндогенного GPC6 в первичных хондроцитах, выделенных из E18.5 бедренных костей. показывает, что, как и в случае клеток NIH 3T3, обработка Shh в течение 1 часа индуцировала очень четкую миграцию GPC6 в реснички хондроцитов и что его присутствие в этом придатке резко снижается после 4 часов обработки Shh.

Shh индуцирует миграцию GPC6 в первичных хондроцитах. (A) Хондроциты, выделенные из бедренной кости E18.5, обрабатывали средой, кондиционированной Shh или векторным контролем, в течение 1 часа. Затем клетки иммуноокрашивали антителами к GPC6 (красный) и ацетилированный тубулин (зеленый).Прямоугольники в углах представляют собой сдвинутые наложения увеличений указанных областей, содержащих реснички (столбики, 1 мкм). (B) Флуоресценцию GPC6 в ресничках хондроцитов измеряли до и после обработки Shh в указанные моменты времени. Показанные интенсивности флуоресценции представляют собой среднее значение измерений, проведенных в следующем количестве клеток: 28 (0 часов), 27 (1 час), 12 (2 часа) и 12 (4 часа) ± стандартное отклонение.

Обсуждение

В этом исследовании мы показываем, что у мышей GPC6 -null длинные кости значительно короче, чем у нормальных однопометников.Кроме того, у мутантных мышей наблюдается тяжелый лицевой дисморфизм. Следовательно, эти наблюдения показывают, что GPC6-нулевые мыши представляют собой хорошую модель для изучения молекулярных основ OMOD1. Мы также создали линию мышей, у которых GPC6 был специфически удален в хондроцитах. В отличие от глобального KO, специфичные для хондроцитов мутанты GPC6 жизнеспособны, но они также обнаруживают значительное укорочение длинных костей. Это подтверждает, что GPC6 играет непосредственную роль в развитии костей.

Примечательно, что OMOD1 — это второе генетическое состояние человека, характеризующееся аномальным развитием костей, в которое вовлечен член семейства GPC. Синдром избыточного роста Симпсона-Голаби-Бемеля вызывается мутациями потери функции в гене GPC3 (Pilia et al., 1996). Ранее мы продемонстрировали, что GPC3 действует как ингибитор передачи сигналов Hh в эмбриональной кости, и мы предположили, что избыточный рост, наблюдаемый у пациентов Simpson-Golabi-Behmel, вызван, по крайней мере частично, повышенной активностью Hh (Capurro et al. ., 2008, 2009). Интересно, что в этом исследовании мы показали, что в контексте развития длинных костей GPC6 проявляет противоположную активность по сравнению с GPC3: он действует, стимулируя передачу сигналов Hh, что убедительно свидетельствует о том, что OMOD1 вызывается, по крайней мере частично, снижением Hh. активность в развивающихся длинных костях.

Настоящее исследование предоставляет обширные доказательства того, что GPC6 стимулирует передачу сигналов Hh. Во-первых, мы показали, что экспрессия Gli1 и Ptc1, двух хорошо установленных мишеней пути Hh, значительно снижена в развивающихся бедрах GPC6 -нулевых мышей.Во-вторых, скрещивая GPC6 -гетерозиготных мышей с Ihh -гетерозиготных мышей, мы предоставили генетические доказательства, указывающие на то, что сигнальный путь Ihh опосредует регуляторную активность GPC6 на рост эмбриональной кости. В-третьих, мы продемонстрировали, что GPC6 может сильно стимулировать передачу сигналов Hh в анализах репортера люциферазы. В-четвертых, мы показали, что GPC6 может связываться с Shh и Ihh с высоким сродством. Кроме того, наш вывод о том, что хондроциты ростовой пластинки из развивающихся костей с отсутствием GPC6 обнаруживают сниженную пролиферацию по сравнению с хондроцитами из нормальных однопометников, также согласуется с ролью GPC6 как позитивного регулятора передачи сигналов Hh.

GPCs, как было установлено, регулируют каноническую (зависимую от β-catenin) и неканоническую (независимую от β-catenin) передачу сигналов Wnt. Wnt5a является хорошо изученным стимулятором неканонической передачи сигналов Wnt. Примечательно, что Wnt5a -нулевых мышей обнаруживают перинатальную летальность, тяжелую карликовость, короткие конечности и лицевой дисморфизм (Yamaguchi et al., 1999). Т.о., в принципе, если GPC6 является позитивным регулятором неканонической передачи сигналов Wnt, можно предположить, что фенотип нулевых эмбрионов GPC6 вызван, по крайней мере частично, снижением передачи неканонических сигналов Wnt.Одним из хорошо известных изменений, индуцируемых Wnt5a во многих типах клеток, является фосфорилирование Dvl3 и Dvl2, и Wnt5a -нулевых эмбрионов обнаруживают значительное снижение такого фосфорилирования (Ho et al., 2012). Однако мы не обнаружили какой-либо значительной разницы в степени фосфорилирования Dvl3 и Dvl2 в бедренной кости GPC6 -null по сравнению с таковыми у однопометников дикого типа (рис. S3). Таким образом, даже если мы не можем исключить роль неканонического пути Wnt в фенотипе мышей GPC6 -null, маловероятно, что этот путь является важным медиатором регуляторной активности GPC6 в развитии костей.В этом отношении следует отметить, что Wnt5a -нулевых мышей обнаруживают резкое снижение экспрессии Ihh в развивающихся длинных костях (Yang et al., 2003). Следовательно, возможно, что укороченные кости у Wnt5a -null эмбрионов являются, по крайней мере частично, косвенным следствием снижения передачи сигналов Ihh.

Наши исследования in vitro показали, что GPC6 стимулирует передачу сигналов Hh за счет увеличения взаимодействия Shh с Ptc1 (). Основываясь на этом открытии и на наших результатах, показывающих, что GPC6 взаимодействует как с Shh, так и с Ptc1 (), мы предполагаем, что GPC6 усиливает передачу сигналов Hh за счет образования комплекса с этими двумя белками, который облегчает / стабилизирует их взаимодействие.

Мы продемонстрировали с помощью анализа SPR, что Shh и Ihh могут напрямую связываться с высоким сродством с коровым белком GPC6 (). Ранее мы показали, что основной белок GPC3 также может связываться с высоким сродством с Shh и Ihh (Capurro et al., 2008). Сходным образом сообщалось, что Drosophila Hh непосредственно взаимодействует с коровым белком GPC Dlp (Yan et al., 2010). Однако взаимодействие GPC5 с Shh опосредуется цепями GAG (Li et al., 2011). Молекулярная основа этого дифференциального взаимодействия основных белков различных GPCs с Hhs еще предстоит раскрыть.

Мы также показали здесь, что GPC6 может связываться с Ptc1 и что это взаимодействие опосредуется цепями GAG. Сходные находки были получены для GPC5 (Li et al., 2011). Следовательно, мы предполагаем, что GPC6 стимулирует передачу сигналов Hh путем связывания как с Hh, так и с Ptc1 и облегчая / стабилизируя их взаимодействие. Таким образом, можно было ожидать, что негликанированный GPC6ΔGAG не сможет стимулировать передачу сигналов Hh. Экспериментально мы обнаружили, что высокие уровни экспрессии этого мутанта могут оказывать умеренный стимулирующий эффект на активность Hh ().Это открытие можно объяснить тем фактом, что Hh может связываться с высоким сродством с коровым белком GPC6. Это взаимодействие должно увеличивать концентрацию Hh на поверхности клетки, тем самым уменьшая размерность движения лиганда и, следовательно, увеличивая частоту встреч между Hh и Ptc1. Этот механизм был предложен для объяснения стимулирующих эффектов многих протеогликанов клеточной поверхности на передачу сигналов в клетках (Schlessinger et al., 1995).

Одним из наиболее важных результатов этого исследования является то, что, в то время как в отсутствие Hh, GPC6 расположен вне первичной реснички, добавление Hh приводит к миграции GPC6 в этот придаток, где обычно запускается передача сигналов Hh () .Примечательно, что накопление ресничек может быть обнаружено уже через 30 минут после добавления Hh, но GPC6 не остается очень долго в ресничках, становясь почти не обнаруживаемым в этом месте через 4 часа. Интересно, что мы также наблюдали, что в присутствии Hh, GPC6 стимулирует накопление Smo в этой органелле (). Hh-индуцированная миграция GPC6 в реснички наблюдалась как в эмбриональных фибробластах, трансфицированных GPC6 (), так и в первичных хондроцитах бедренной кости, экспрессирующих эндогенный GPC6. Локализация GPC6 в ресничке в присутствии Hh согласуется с его способностью связываться с Ptc1 и стимулировать активность Hh.

Мы ранее сообщали, что GPC5 располагается в ресничке даже в отсутствие экзогенного Hh (Li et al., 2011). Однако GPC3 располагается вне ресничек в присутствии и в отсутствие этого фактора роста (Li et al., 2011). Следовательно, кажется, что локализация в ресничках коррелирует со способностью данного GPC стимулировать передачу сигналов Hh.

В настоящее время механизм Hh-индуцированной миграции в реснички остается неизвестным. Однако тот факт, что негликанированный мутант GPC6ΔGAG не перемещается к ресничкам в присутствии Hh, предполагает, что GPC6 может совмещать цепи GAG с другим белком, который обладает способностью мигрировать в реснички в присутствии Hh.

Материалы и методы

Штаммы мышей

Gpc6 -гетерозиготных мышей (B6N.129S5- Gpc6 ^{tm1 / Lex} / Mmcd) были получены из Регионального ресурсного центра мутантных мышей при Университете Сан-Диего. Ihh -гетерозиготных мышей приобретали в лаборатории Джексона. Мыши C57BL / 6 WT были получены от Charles River Canada Laboratories. Все процедуры, используемые для экспериментов на мышах, были одобрены Комитетом по уходу за животными Исследовательского института Саннибрук.

Для создания хондроцит-специфичных мышей GPC6 -null у EUCOMM была приобретена линия мышей, содержащая флоксированный аллель GPC6 . Модифицированный аллель имел два сайта loxP, фланкирующих экзон 3 GPC6 , а также ген неомицина и репортер LacZ, фланкированные двумя сайтами-мишенями распознавания флиппазы. Этих мышей скрещивали с трансгенными мышами C57BL / 6N Flp-рекомбиназы (под контролем промотора ActnB) для удаления маркера Neo и репортерного гена LacZ в каждой клетке.Полученных мышей скрещивали с трансгенными мышами B6; SJL-Tg (Col2α1- Cre ) 1Bhr / J (приобретенными в лабораториях Джексона), экспрессирующими рекомбиназу Cre под контролем промотора гена Col2α1. Поскольку ген Col2α1 экспрессируется в хондроцитах, это скрещивание приводит к иссечению экзона 3 GPC6 конкретно в этих клетках и, следовательно, к образованию хрящевой мыши с GPC6 -нулем. После обратного скрещивания на фоне C57BL / 6N мышей, гетерозиготных по аллелю GPC6 KO в хондроцитах, скрещивали между собой с получением хрящ-специфичных мышей GPC6 -null.

Разведение и переработка мышей

GPC6 Однопометники KO и WT были получены путем скрещивания гетерозигот GPC6 . Двойные гетерозиготы GPC6-Ihh сначала были получены путем скрещивания гетерозигот GPC6 и Ihh , а затем скрещены с образованием двойных KO-эмбрионов GPC6 / Ihh . Вес эмбрионов E17.5 – E18.5 был определен сразу после вскрытия. Затем были собраны образцы кончиков хвостов, которые впоследствии генотипировали с помощью ПЦР.Целые эмбрионы или рассеченные конечности обрабатывали для окрашивания альциановым синим-ализарином. Срезы тканей рассеченных бедренных костей залили парафином для иммуногистохимического анализа. Бедренную РНК выделяли для оценки целевых уровней Hh с помощью ПЦР в реальном времени. Гистопатологическое исследование всего эмбриона проводилось в Центре моделирования болезней человека, Центр феногеномики Торонто.

Клеточные линии и плазмиды

Клетки 293T и NIH 3T3 (полученные из ATCC) культивировали в DMEM с добавлением 10% FBS при 37 ° C в увлажненной атмосфере с 5% CO ₂ .Первичные хондроциты были получены из эмбрионов мыши, как описано ранее (Gosset et al., 2008), и культивированы в среде DMEM с добавлением 10% FBS и 2 мМ глутамина. Векторы экспрессии для GPC6, GPC6ΔGAG, GPC3, GPC3ΔGAG, GPC6-AP, GPC6ΔGAG-AP, полностью процессированного Shh, ShhN, AP, Shh-AP и Ptc-HA были описаны ранее (Capurro et al., 2008, 2014).

Анализ включения BrdU

Беременным мышам в возрасте 15,5 дня вводили внутрибрюшинно за 1 час до умерщвления 400 мкл реагента для мечения BrdU (набор для метки и обнаружения BrdU II; Roche).Эмбриональные бедренные кости иссекали, фиксировали в 10% формалине в течение ночи и хранили в 70% этаноле до обработки. Были приготовлены залитые парафином срезы, и окрашивание BrdU было выполнено с помощью мышиных моноклональных антител против BrdU (клон BMG6H8; Roche) и набора для иммунодетекции мыши на мышах (M.O.M.) (VECTOR Laboratories). Срезы тканей были заблокированы в M.O.M. блокирующим реагентом, а затем инкубировали с антителом против BrdU (1:10 в разбавителях M.O.M.) в течение ночи при 4 ° C. После двукратной промывки PBS на 10 мин добавляли биотинилированное антитело против IgG мыши.Связанные антитела выявляли с помощью вектастаина ABC и DAB. Для количественной оценки мечения BrdU подсчитывали все BrdU-положительные и -отрицательные ядра в каждом срезе бедренной кости.

Количественная оценка транскриптов Ptc1 и Gli1

Бедренные кости E15.5 иссекали и РНК экстрагировали с использованием реагента TRIzol (Invitrogen). кДНК получали путем обратной транскрипции с использованием праймеров oligo (dT) _12–18 (Invitrogen). Относительные уровни транскриптов Ptc1 и Gli1 измеряли с помощью ОТ-ПЦР в реальном времени, используя уровни транскриптов β-актина в качестве стандартов.Использовали систему обнаружения последовательности (ABI Prism 7000; Applied Biosystems) и QuantiTect SYBR Green (Qiagen). Последовательности используемых олигонуклеотидных праймеров были: Gli1 прямой (F), 5′-AGGGAGGAAAGCAGACTGAC-3 ‘и обратный (R), 5′-CCAGTCATTTCCACACCACT-3′; Ptc1 F, 5’-CAAGTGTCGTCCGGTTTGC-3 ‘и R, 5′-CTGTACTCCGAGTCGGAGGAA-3′; и β-актин F, 5’-TTCTACAATGAGCTGCGTGTG-3 ‘и R, 5′-GGGGTGTTGAAGGTCTCAAA-3’.

Иммуногистохимия

Эмбриональные бедренные кости иссекали, фиксировали в 10% формалине в течение ночи и хранили в 70% этаноле до обработки.Залитые парафином срезы пластинки роста бедренной кости получали из эмбрионов E15.5. Ihh, Ki67 и Cyclin D1 иммуноокрашивали антителами от Santa Cruz (sc-1196; 1:75), Cell Signaling (№ 12202; 1: 400) и Abcam (ab134175; 1: 200) соответственно. DAB использовался как агент, проявляющий цвет.

Анализ репортера Hh

Клетки NIH 3T3 высевали в 6-луночные планшеты (220 000 клеток / лунку) и трансфицировали репортером Hh-люциферазы, плазмидой β-галактозидазы и указанными векторами экспрессии.Через 1 день после трансфекции клетки переносили в 24-луночные планшеты при 50% конфлюэнтности, а на следующий день добавляли Shh-, ShhN- или контрольную кондиционированную среду на 48 часов. Затем клетки лизировали и измеряли активность люциферазы. Это измерение было нормализовано по соответствующей активности β-галактозидазы. Shh-, ShhN- и контрольную кондиционированную среду, содержащую 2% FBS, получали путем трансфекции клеток 293T векторами экспрессии SHH или ShhN или векторным контролем соответственно. Среду собирали через 4 дня после трансфекции.

Анализ связывания Shh-Ptc1

Клетки NIH 3T3 временно трансфицировали возрастающими количествами GPC6, GPC3 или векторного контроля. Спустя 2 дня трансфицированные клетки инкубировали в течение 2,5 ч при 4 ° C с кондиционированной средой, содержащей слитый белок Shh-AP или только AP. После отмывки клетки лизировали, и эндогенный Ptc1 подвергался иммунопреципитации. Затем активность АР в иммунопреципитате измеряли с помощью набора таблеток п-нитрофенилфосфата (SIGMAFAST; Sigma-Aldrich). Активность АР иммунопреципитатов из клеток, инкубированных только с АР, вычитали из каждого образца.

Анализ SPR

Этот анализ был выполнен, как описано ранее, с системой Biacore T200 (GE Healthcare; Li et al., 2011). Вкратце, слитые белки GPC6-AP и GPC6ΔGAG-AP очищали из кондиционированной среды, созданной клетками 293T, трансфицированными соответствующими векторами экспрессии. Очистка состояла из анионообменной хроматографии с последующей аффинной хроматографией на анти-AP. Очищенные GPC биотинилировали с помощью EZ-link Sulfo-NHS-LC биотина (Thermo Fisher Scientific) и затем иммобилизовали на сенсорных чипах стрептавидина (SA) (1300 и 800 единиц ответа для GPC6-AP и GPC6ΔGAG-AP, соответственно).Для определения профиля связывания инъецировали различные концентрации (от 62,5 до 1000 нМ) рекомбинантных Shh или Ihh. Скорость потока 30 мкл / мин. Для контроля неспецифической ассоциации Shh или Ihh с сенсорным чипом SA растворы анализируемого вещества инъецировали на свободную от лиганда поверхность и вычитали из данных связывания перед анализом. Все измерения были выполнены в трех экземплярах. Сенсограммы анализировали с использованием модели лиганда 1: 1, предоставленной в программе BIAevaluation (GE Healthcare), для расчета констант скорости ассоциации и диссоциации (k _a и k _d , соответственно).

Pull-down анализ

Клетки 293T трансфицировали вектором экспрессии Ptc1, меченным НА. Через 2 дня после трансфекции клетки лизировали, и лизаты инкубировали с моноклональным антителом против НА (12CA5; Roche), которое было прикреплено к шарикам протеина G-сефарозы (Sigma-Aldrich). Затем покрытые Ptc1 шарики блокировали 5% BSA в PBS, содержащем 0,1% Triton X-100, в течение 90 минут при комнатной температуре, и аликвоты, содержащие равные количества шариков, инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре с GPC6-AP, GPC6ΔGAG. -AP, или среда, управляемая AP.После четырех промывок 20 мМ Hepes, pH 7,4, 150 мМ NaCl и 0,25% Tween 20, активность AP, связанного с шариками, измеряли с помощью набора таблеток p-нитрофенилфосфата (SIGMAFAST). Фоновое связывание измеряли, инкубируя шарики с лизатами клеток 293Т, трансфицированных векторным контролем AP, и его вычитали из каждого измерения образца. Среды GPC-AP получали путем трансфекции клеток 293T экспрессирующими векторами GPC6-AP или GPC6ΔGAG-AP.

Анализ связывания GPC6-Ptc1

Клетки 293T высевали на 24-луночные планшеты и трансфицировали вектором экспрессии Ptc1 или векторным контролем (pcDNA).Трансфицированные клетки инкубировали с GPC6-AP–, GPC6ΔGAG-AP– или АР-кондиционированной средой, содержащей равные концентрации АР, в течение 2 ч при 4 ° C. Клетки тщательно промывали PBS и лизировали в 1% Тритоне и 10 мМ Трис, pH 8,0, при комнатной температуре в течение 5 минут, и измеряли активность АР аликвот клеточных лизатов, содержащих такое же количество белка. GPC6-AP–, GPC6ΔGAG-AP– или AP-кондиционированные среды получали путем трансфекции клеток 293T соответствующими векторами экспрессии. Через 16 часов после трансфекции кондиционированные среды собирали в течение 24 часов в среде с 10% FCS.

Локализация GPC6, GPC6ΔGAG и Smo

Клетки NIH 3T3 трансфицировали указанными векторами экспрессии с использованием Lipofectamine 3000 (InvitroGen). Спустя 1 день клетки разделяли и высевали на обработанные поли-l-лизином покровные стекла. Затем клетки голодали в бессывороточной среде в течение ночи и добавляли Shh-кондиционированную среду на указанные периоды времени. Затем клетки инкубировали при 37 ° C в увлажненной атмосфере с 5% CO ₂ . После трехкратной промывки PBS клетки фиксировали 4% параформальдегидом в PBS в течение 10 мин при 4 ° C.Фиксированные клетки блокировали в течение 30 минут 2% BSA в PBS и выполняли иммунофлуоресцентный анализ. Для обнаружения GPC6 клетки инкубировали с антителом против GPC6 (AF2845; 1: 500; R&D). После трехкратной промывки PBS были добавлены вторичные антитела, связанные с Alexa Fluor. Затем клетки промывали и повышали проницаемость с помощью 0,1% Triton X-100 в PBS в течение 10 минут и блокировали в течение 30 минут в 2% BSA. Первичные реснички визуализировали с помощью mAb против ацетилированного тубулина (T7451; 1: 1000; Sigma-Aldrich).Smo визуализировали с помощью кроличьих mAb против НА (C29F4; Cell Signaling) или анти-Smo (ab38686; 1: 1000; Abcam). После трехкратной промывки PBS вторичные антитела, связанные с Alexa Fluor, добавляли в блокирующий раствор при разведении 1: 1000 в течение 1 часа при комнатной температуре. Конфокальные изображения были получены с использованием микроскопии с вращающимся диском и обозревателя изображений Zeiss LSM. Все изображения были сделаны с эквивалентным временем экспозиции. Анализ изображений проводился с помощью программы Zen 2 (синяя версия). Вкратце, маска, которая была сконструирована путем выделения ресничек вручную на изображении окрашивания ацетилированным тубулином, была применена к изображениям, окрашенным GPC6 или Smo, для измерения интенсивности флуоресценции в ресничках.Фон, который вычитали из интенсивности флуоресценции в ресничках, получали путем измерения нескольких репрезентативных областей на клетке путем перемещения маски. Для локализации эндогенного GPC6 в первичных хондроцитах использовали только свежеполученные клетки (P1). Перед окрашиванием клетки голодали в бессывороточной среде в течение ночи.

Дополнительный онлайн-материал

На рис. S1 показан вестерн-блот-анализ Ihh бедренной кости E17.5. На рис. S2 показан анализ репортера Hh. Инжир.S3 показывает, что передача сигналов Wnt не изменяется в GPC6-null бедренной кости.

Выражение признательности

Мы благодарим Сьюзан Ньюбигинг из Центра моделирования болезней человека, Центр феногеномики Торонто, за ее помощь в характеристике мышей с нулевым GPC6, а также Ану Белинду Кампос-Ксавье и Лауреан Миттаз-Креттол за их помощь в исследовании. создание тканеспецифической модели мыши.

Этот проект финансировался Канадским институтом исследований в области здравоохранения (грант MOP142344 J.Filmus) и Швейцарским национальным исследовательским фондом (грант 310030_132940 Л. Бонафе). Томоми Идзумикава и Томуюки Канейва были поддержаны зарубежными стипендиями Японского общества содействия науке.

Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих финансовых интересов.

Вклад авторов: М. Капурро разработал и выполнил анализ фенотипа глобальных мышей GPC6 -null, количественное определение Ptc1 и Gli1, анализ двойных мутантов GPC6 / Ihh , репортер Hh анализы и анализ связывания Shh-Ptc1.T. Izumikawa разработал и выполнил анализ Ptc1-GPC6 pull-down и анализ локализации GPC6 и Smo в клетках NIH 3T3 и первичных хондроцитах. P. Suarez создал и проанализировал хондроцит-специфичных мышей GPC6 -мутантов. W. Shi выполнил анализ включения BrdU и иммуногистохимию для обнаружения циклина D1, Ihh и Ki67 и внес свой вклад в выполнение некоторых анализов репортера Hh и в анализ локализации GPC6 и Smo в клетках NIH 3T3.М. Цыдзик разработал и выполнил анализ SPR. T. Kaneiwa участвовал в проведении исследований по локализации GPC6 и Smo. Дж. Гариепи участвовал в написании рукописи. Л. Бонапарт участвовал в разработке проекта, разработал и проанализировал эксперименты с мышами-мутантами GPC6 , специфичными для хондроцитов, и участвовал в написании рукописи. Дж. Фильмус задумал проект, разработал и проанализировал результаты экспериментов, а также написал рукопись.

Сноски

Используемые сокращения:

GAG

гликозаминогликан

GPC

глипикан

HA

гемагглютинин A

Hh

hedge909

hh

hedgehog KO

нокаут

Ptc1

исправлен 1

SA

стрептавидин

SAG

Smo agonist

Shh

Sonic Hh

Smomon Resoned 909 909 Поверхность Smomon 9090

• Аренс М.Дж., Ли Ю., Цзян Х. и Дадли А.Т. 2009 г. Конвергентные движения вытяжения в хондроцитах ростовой пластинки требуют gpi-заякоренных белков клеточной поверхности. Разработка. 136: 3463–3474. 10.1242 / dev.040592 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Акияма Т., Камимура К., Фиркус К., Такео С., Шимми О. и Накато Х .. 2008 г. Dally регулирует формирование градиента морфогена Dpp путем стабилизации Dpp на поверхности клетки. Dev. Биол. 313: 408–419. 10.1016 / j.ydbio.2007.10.035 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Аллен Н.Дж., Беннетт М.Л., Фу Л.С., Ван Г.Х., Чакраборти К., Смит С.Дж. и Баррес Б.А. 2012 г. Глипиканы астроцитов 4 и 6 способствуют образованию возбуждающих синапсов через рецепторы GluA1 AMPA. Природа. 486: 410–414. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]
• Бандари С., Экснер С., Ортманн К., Бачварова В., Форткамп А. и Гробе К. 2015 г. Sweet on Hedgehogs: регуляторные роли гепарансульфатных протеогликанов в Hedgehog-зависимой пролиферации и дифференцировке клеток. Curr. Protein Pept.Sci. 16: 66–76. 10.2174 / 1389203716666150213162649 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Bar E.E., Chaudhry A., Farah M.H., and Eberhart C.G .. 2007 г. Передача сигналов Hedgehog способствует выживанию медуллобластомы через Bc / II. Являюсь. J. Pathol. 170: 347–355. 10.2353 / ajpath.2007.060066 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Бороховиц З., Сабо Э., Мисселевич И. и Босс Дж. Х .. 1998 г. Аутосомно-рецессивная омодисплазия: пренатальная диагностика и гистоморфометрическая оценка физиологических пластинок длинных костей.Являюсь. J. Med. Genet. 76: 238–244. 10.1002 / (SICI) 1096-8628 (19980319) 76: 3 <238 :: AID-AJMG7> 3.0.CO; 2-M [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Briscoe J., and Thérond P.P .. 2013. Механизмы передачи сигналов Hedgehog и их роль в развитии и болезни. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 14: 416–429. 10.1038 / nrm3598 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Campos-Xavier AB, Martinet D., Bateman J., Belluoccio D., Rowley L., Tan TY, Baxová A., Gustavson KH, Borochowitz ZU, Innes А.М., et al. . 2009 г. Мутации в гепаран-сульфатном протеогликане глипикане 6 (GPC6) нарушают эндохондральную оссификацию и вызывают рецессивную омодисплазию. Являюсь. J. Hum. Genet. 84: 760–770. 10.1016 / j.ajhg.2009.05.002 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Капурро М.И., Сюй П., Ши В., Ли Ф., Цзя А. и Фильмус Дж. 2008 г. Глипикан-3 подавляет передачу сигналов Hedgehog во время развития, конкурируя с патчем за связывание Hedgehog. Dev. Клетка. 14: 700–711. 10.1016 / j.devcel.2008.03.006 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Капурро М.И., Ли Ф. и Фильмус Дж. 2009 г. Разрастание мышиной модели синдрома Симпсона-Голаби-Бемеля частично опосредовано индийским ежом. EMBO Rep. 10: 901–907. 10.1038 / embor.2009.98 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Капурро М., Мартин Т., Ши В. и Фильмус Дж. 2014 г. Глипикан-3 связывается с Frizzled и играет прямую роль в стимуляции канонической передачи сигналов Wnt. J. Cell Sci. 127: 1565–1575. 10.1242 / jcs.140871 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Десбордес С.К. и Сансон Б. 2003 г. Глипикан Dally-like необходим для передачи сигналов Hedgehog в эмбриональном эпидермисе Drosophila . Разработка. 130: 6245–6255. 10.1242 / dev.00874 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Эльчиоглу Н.Х., Густавсон К.Х., Уилки А.О., Юксель-Апак М. и Шпрангер Дж. У. 2004 г. Рецессивная омодисплазия: пять новых случаев и обзор литературы. Педиатр. Радиол. 34: 75–82. 10.1007 / s00247-003-1064-9 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Filmus J., и Capurro M .. 2012 г. Семейство глипиканов. В Внеклеточный матрикс: патобиология и сигнализация. Караманос Н.К., редактор. Де Грюйтер, Берлин / Бостон: 209–220. 10.1515 / 9783110258776.209 [CrossRef] [Google Scholar]
• Фильмус Дж. И Капурро М. 2014 г. Роль глипиканов в передаче сигналов Hedgehog. Matrix Biol. 35: 248–252. 10.1016 / j.matbio.2013.12.007 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Фильмус Дж., Капурро М. и Раст Дж. 2008 г. Глипиканы. Genome Biol. 9: 224 10.1186 / gb-2008-9-5-224 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Гао Б., Ху Дж., Стрикер С., Чунг М., Ма Г., Ло К.Ф. , Витте Ф., Бриско Дж., Мундлос С., Хе Л. и др. . 2009 г. Мутация в Ihh, вызывающая аномалии пальцев, изменяет его сигнальную способность и диапазон. Природа. 458: 1196–1200. 10.1038 / nature07862 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Госсет М., Беренбаум Ф., Тирион С. и Жак С. 2008 г. Первичная культура и фенотипирование хондроцитов мышей.Nat. Protoc. 3: 1253–1260. 10.1038 / nprot.2008.95 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Хагихара К., Ватанабе К., Чун Дж. И Ямагути Ю. 2000 г. Глипикан-4 представляет собой протеогликан гепарансульфата, связывающийся с FGF2, экспрессируемый в клетках-предшественниках нервной системы. Dev. Дин. 219: 353–367. 10.1002 / 1097-0177 (2000) 9999: 9999 <:: AID-DVDY1059> 3.0.CO; 2- # [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Hilton MJ, Gutiérrez L., Martinez DA, and Wells DE . 2005 г. EXT1 регулирует пролиферацию и дифференцировку хондроцитов во время развития эндохондральной кости.Кость. 36: 379–386. 10.1016 / j.bone.2004.09.025 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Ho H.Y.H., Susman M.W., Bikoff J.B., Ryu Y.K., Jonas A.M., Hu L., Kuruvilla R., and Greenberg M.E .. 2012 г. Передача сигналов Wnt5a-Ror-Disheveled составляет основной путь развития, который контролирует морфогенез тканей. Proc. Natl. Акад. Sci. СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ. 109: 4044–4051. 10.1073 / pnas.1200421109 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Ingham P.W., Nakano Y. и Seger C. 2011 г. Механизмы и функции передачи сигналов Hedgehog через многоклеточные.Nat. Преподобный Жене. 12: 393–406. 10.1038 / nrg2984 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Джексон С.М., Накато Х., Сугиура М., Яннузи А., Оукс Р., Калуца ​​В., Голден С. и Селлек С. 1997 г. dally, глипикан Drosophila, контролирует клеточные ответы на связанный с TGF-бета морфоген, Dpp. Разработка. 124: 4113–4120. [PubMed] [Google Scholar]
• Карсенти Г., Кроненберг Х.М. и Сеттембр С. 2009 г. Генетический контроль костеобразования. Анну. Rev. Cell Dev. Биол. 25: 629–648. 10.1146 / annurev.cellbio.042308.113308 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Koziel L., Wuelling M., Schneider S. и Vortkamp A .. 2005 г. Gli3 действует как репрессор ниже Ihh в регуляции двух различных стадий дифференцировки хондроцитов. Разработка. 132: 5249–5260. 10.1242 / dev.02097 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Lee R.T.H., Zhao Z. и Ingham P.W .. 2016 г. Сигнал Ёжик. Разработка. 143: 367–372. 10.1242 / dev.120154 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Ли Ф., Ши В., Капурро М. и Фильмус Дж. 2011 г. Глипикан-5 стимулирует пролиферацию клеток рабдомиосаркомы, активируя передачу сигналов Hedgehog. J. Cell Biol. 192: 691–704. 10.1083 / jcb.201008087 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Long F., Zhang X.M., Karp S., Yang Y. и McMahon A.P .. 2001 г. Генетические манипуляции с передачей сигналов hedgehog в эндохондральном скелете обнаруживают прямую роль в регуляции пролиферации хондроцитов. Разработка. 128: 5099–5108. [PubMed] [Google Scholar]
• Лонг Ф., Joeng K.S., Xuan S., Efstratiadis A., McMahon A.P .. 2006 г. Независимая регуляция роста скелета с помощью передачи сигналов Ihh и IGF. Dev. Биол. 298: 327–333. 10.1016 / j.ydbio.2006.06.042 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Лум Л., Яо С., Мозер Б., Ровескалли А., Фон Кесслер Д., Ниренберг М. и Бичи П.А. 2003 г. Идентификация компонентов пути Hedgehog с помощью РНКи в культивируемых клетках Drosophila . Наука. 299: 2039–2045. 10.1126 / science.1081403 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Mackie E.Дж., Ахмед Ю.А., Татарчуч Л., Чен К.С., Мирамс М. 2008 г. Эндохондральная оссификация: как хрящ превращается в кость в развивающемся скелете. Int. J. Biochem. Cell Biol. 40: 46–62. 10.1016 / j.biocel.2007.06.009 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Окавара Б., Ямамото Т.С., Тада М. и Уэно Н. 2003 г. Роль глипикана 4 в регуляции конвергентных движений разгибания во время гаструляции у Xenopus laevis. Разработка. 130: 2129–2138. 10.1242 / dev.00435 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Оливер Т.Г., Грасфедер Л.Л., Кэрролл А.Л., Кайзер К., Гиллингем С.Л., Лин С.М., Викрамасингх Р., Скотт М.П. и Векслер-Рейя Р.Дж. 2003 г. Транскрипционное профилирование ответа Sonic hedgehog: критическая роль N-myc в пролиферации предшественников нейронов. Proc. Natl. Акад. Sci. СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ. 100: 7331–7336. 10.1073 / pnas.0832317100 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Pilia G., Hughes-Benzie RM, MacKenzie A., Baybayan P., Chen EY, Huber R., Neri G., Цао А., Форабоско А., и Шлессингер Д. 1996 г. Мутации в GPC3, гене глипикана, вызывают синдром избыточного роста Симпсона-Голаби-Бемеля. Nat. Genet. 12: 241–247. 10.1038 / ng0396-241 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Razzaque M.S., Soegiarto D.W., Chang D., Long F., and Lanske B. 2005 г. Условная делеция индийского ежа из клеток, экспрессирующих коллаген 2α1 типа, приводит к аномальному образованию эндохондральной кости. J. Pathol. 207: 453–461. 10.1002 / path.1870 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Роббинс Д.Дж., Фей Д.Л. и Риобо Н.А. 2012 г. Сеть передачи сигналов Hedgehog. Sci. Сигнал. 5: re6 10.1126 / scisignal.2002906 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Рохатги Р., Миленкович Л. и Скотт М.П .. 2007 г. Patched1 регулирует передачу сигналов hedgehog в первичных ресничках. Наука. 317: 372–376. 10.1126 / science.1139740 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Райан К.Э. и Чианг С. 2012 г. Секреция ежей и передача сигналов у позвоночных. J. Biol.Chem. 287: 17905–17913. 10.1074 / jbc.R112.356006 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Schlessinger J., Lax I., and Lemmon M .. 1995 г. Регуляция активации факторов роста протеогликанами: какова роль рецепторов с низким сродством? Клетка. 83: 357–360. 10.1016 / 0092-8674 (95)

  -4 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

• Сонг Х. Х., Ши В., Сян Ю. Я. и Фильмус Дж. 2005 г. Потеря глипикана-3 вызывает изменения в передаче сигналов Wnt. J. Biol. Chem. 280: 2116–2125.10.1074 / jbc.M4100 ^{[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]}
• St-Jacques B., Hammerschmidt M., and McMahon A.P .. 1999 г. Передача сигналов Indian hedgehog регулирует пролиферацию и дифференцировку хондроцитов и необходима для формирования костей. Genes Dev. 13: 2072–2086. 10.1101 / gad.13.16.2072 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Танежа-Багешвар С. и Гумиенни Т.Л .. 2013. Регуляция передачи сигналов суперсемейства TGFβ двумя разделяемыми доменами глипикана LON-2 в C.elegans . Червь. 2: e23843 10.4161 / worm.23843 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Tang T., Li L., Tang J., Li Y., Lin WY, Martin F., Grant D., Solloway М., Паркер Л., Е. В. и др. . 2010 г. Библиотека нокаута мыши для секретируемых и трансмембранных белков. Nat. Biotechnol. 28: 749–755. 10.1038 / nbt.1644 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Тофтгорд Р. 2009 г. Две стороны ресничек при раке. Nat. Med. 15: 994–996. 10.1038 / nm0909-994 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Уильямс Э.Х., Паппано В.Н., Сондерс А.М., Ким М.С., Лихи Д.Дж. и Бичи П.А. 2010 г. Dally-подобный коровый белок и его гомологи у млекопитающих опосредуют стимулирующее и ингибирующее действие на сигнальный ответ Hedgehog. Proc. Natl. Акад. Sci. СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ. 107: 5869–5874. 10.1073 / pnas.1001777107 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Уилсон Н.Х. и Стоекли Э. 2013. Sonic hedgehog регулирует свой собственный рецептор на посткроссинге комиссуральных аксонов глипикан-1-зависимым образом. Нейрон. 79: 478–491.10.1016 / j.neuron.2013.05.025 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Witt RM, Hecht ML, Pazyra-Murphy MF, Cohen SM, Noti C., van Kuppevelt TH, Fuller M., Chan JA, Хопвуд Дж. Дж., Сибергер PH и Сигал Р. А.. 2013. Гепарансульфатные протеогликаны, содержащие ядро ​​глипикана 5 и 2- O -сульфоидуроновую кислоту, действуют как корецепторы Sonic Hedgehog, способствуя пролиферации. J. Biol. Chem. 288: 26275–26288. 10.1074 / jbc.M112.438937 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Ямагути Т.П., Брэдли А., МакМахон А.П. и Джонс С. 1999 г. Путь Wnt5a лежит в основе роста множества структур в эмбрионе позвоночных. Разработка. 126: 1211–1223. [PubMed] [Google Scholar]
• Ян Д. и Линь X .. 2007 г. Drosophila глипикан Dally-like действует в FGF-принимающих клетках, модулируя передачу сигналов FGF во время морфогенеза трахеи. Dev. Биол. 312: 203–216. 10.1016 / j.ydbio.2007.09.015 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Yan D., Wu Y., Yang Y., Беленькая Т.Ю., Тан X., Линь X .. 2010 г. Белки клеточной поверхности Dally-like и Ihog по-разному регулируют силу и диапазон передачи сигналов Hedgehog во время развития. Разработка. 137: 2033–2044. 10.1242 / dev.045740 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Ян Й., Тополь Л., Ли Х. и Ву Дж. 2003 г. Wnt5a и Wnt5b проявляют разные активности в координации пролиферации и дифференцировки хондроцитов. Разработка. 130: 1003–1015. 10.1242 / dev.00324 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
• Zhang W., Кан Дж. С., Коул Ф., Йи М. Дж. И Краусс Р. С. 2006 г. Cdo функционирует во многих точках пути Sonic Hedgehog, и Cdo-дефицитные мыши точно моделируют голопрозэнцефалию человека. Dev. Клетка. 10: 657–665. 10.1016 / j.devcel.2006.04.005 [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]

HD обои: коричневый ёжик, морда, глаза, шипы, животное, млекопитающее, дикая природа

HD обои: коричневый ёжик, морда, глаза, колючки, животные, млекопитающие, дикая природа | Обои Flare коричневый ежик, морда, глаза, колючки, животное, млекопитающее, дикая природа, HD обои Информация об оригинальных обоях: Размер изображения: 2560x1600px Размер файла: 389.67 КБ WallpaperFlare — это открытая платформа, на которой пользователи могут делиться своими любимыми обоями. Загружая эти обои, вы соглашаетесь с нашими Условиями использования и Политикой конфиденциальности. Это изображение предназначено только для использования в качестве обоев для личного рабочего стола. Если вы являетесь автором и обнаружите, что это изображение используется без вашего разрешения, сообщите нам о нарушении закона США «Об авторском праве в цифровую эпоху», пожалуйста, свяжитесь с нами Выберите разрешение и загрузите эти обои

Загрузите эти обои как рабочий стол ПК и ноутбука (включая разрешения 720P, 1080P, 2K, 4K, для обычных ПК и ноутбуков HP, Lenovo, Dell, Asus, Acer):

Загрузите эти обои как рабочий стол iMac:

iMac 21.5-дюймовый дисплей со светодиодной подсветкой:

1920×1080

Загрузите эти обои как рабочий стол MacBook:

MacBook Air 13 дюймов, MacBook Pro 15,4 дюйма:

Полный размер — 1440×900

MacBook Pro с дисплеем Retina 13,3 дюйма, MacBook Air с дисплеем Retina 13 дюймов, MacBook Air 13,3 дюйма (2020, M1):

2560×1600

Загрузите эти обои как рабочий стол с двумя мониторами:

Скачать эти обои как рабочий стол на тройном мониторе:

Скачать эти обои как рабочий стол для четырех мониторов:

Загрузите эти обои как рабочий стол iPhone или экран блокировки:

iPhone 2G, iPhone 3G, iPhone 3GS:

320 x 480

iPhone 4, iPhone 4s:

640 x 960

iPhone 5, iPhone 5s, iPhone 5c, iPhone SE:

640×1136

iPhone 6, iPhone 6s, iPhone 7, iPhone 8:

750×1334

iPhone 6 plus, iPhone 6s plus, iPhone 7 plus, iPhone 8 plus:

1242×2208

iPhone X, iPhone Xs, iPhone 11 Pro:

1125×2436

iPhone Xs Max, iPhone 11 Pro Max:

1242×2688

iPhone Xr, iPhone 11:

828×1792

iPhone 12 mini, iPhone 13 mini:

1080×2340

iPhone 12, iPhone 12 Pro, iPhone 13, iPhone 13 Pro:

1170×2532

iPhone 12 Pro Max, iPhone 13 Pro Max:

1284×2778

Загрузите эти обои в качестве рабочего стола телефона Android или экрана блокировки (для обычных телефонов Samsung, Huawei, Xiaomi, Redmi, Oppo, Realme, Oneplus, Vivo, Tecno Android):

Загрузите эти обои как рабочий стол iPad или экран блокировки:

iPad, iPad 2, iPad Mini:

768×1024, 1024×768

iPad 3, iPad 4, iPad Air, iPad Air 2, iPad 2017 г., iPad Mini 2, iPad Mini 3, iPad Mini 4, 9.IPad Pro, 7 дюймов:

2048×1536, 1536×2048

iPad Pro 10,5 дюйма:

2224×1668, 1668×2224

iPad Pro 11 дюймов:

2388×1668, 1668×2388

iPad Pro 12,9 дюйма:

2732×2048, 2048×2732

iPad Air 10,9 дюйма:

2360×1640, 1640×2360

iPad 10,2 дюйма:

2160×1620, 1620×2160

iPad mini, 8,3 дюйма:

2266×1488, 1488×2266

Загрузите эти обои в качестве рабочего стола или экрана блокировки планшетов Surface и Android:

Похожие HD обои

• 1920 г. Икс 1200 px

  Sonic the Hedgehog обои, минимализм, Shadow the Hedgehog

• 1920 г. Икс 1200 px

  Sonic the Hedgehog illustration, минимализм, видеоигра, синий

• 1920 г. Икс 1200 px

  коричневый ёжик, листья, трава, осень, колючки, мордочка, животное

• 3440 Икс 5156 px

  коричневый лев обои, мордочка, грива, луок, хищник, зверек

• 2560 Икс 1440 px

  Sonic The Hedgehog lllustration, видеоигры, представление

• 1920 г. Икс 1200 px

  Sonic the Hedgehog digital wallpaper, синий, представление, игрушка

• 1920 г. Икс 1200 px

  Sonic The Hedgehog обои, Shadow the Hedgehog, разноцветные

• 1353 Икс 810 px

  Sonic the Hedgehog illustration, видеоигры, минимализм, простой фон

• 1600 Икс 1200 px

  коричневый ёжик, кактус, колючки, лежать, растение, высокий угол обзора, рост

• 1920 г. Икс 1200 px

  Sonic The Hedgehog, иллюстрация, синий, представление, животное

• 1920 г. Икс 1200 px

  белый и коричневый еж, животные, одно животное, млекопитающее, дикая природа животных

• 1920 г. Икс 1080 px

  Ежик Соник, Super Mario, Crash Bandicoot

• 1440 Икс 900 px

  коричневый ежик картинки, без резьбы, юмор, простой, минимализм

• 7680 Икс 4320 px

  Ежик Соник 2019 Фильм 4K 8K

• 2060 Икс 1159 px

  Соник, Еж Соник (2020)

• 2560 Икс 1600 px

  Sonic The Hedgehog, классная, игры

• 3840 Икс 2160 px

  Белый и коричневый ёжик на коричневой деревянной поверхности, милые животные

• 1920 г. Икс 1080 px

  коричневый ежик анимационная иллюстрация, Sonic the Hedgehog, copy space

• 1200 Икс 1000 px

  Еж Соник, разноцветный, без людей, небо, синий, воздушный шар

• 1500 Икс 2400 px

  sonic the hedgehog 1500×2400 Видеоигры Sonic HD Art

• 3461 Икс 2190 px

  лев, хищник, царь зверей, грива, морда, глаза, кошачий, кот

• 2560 Икс 1600 px

  белый ежик, глаза, морда, млекопитающее, животное, животная тематика, крупный план

• 2048 Икс 1255 px

  коричневый ежик, осень, листва, лист, часть растения, животные темы, трава, осень

• 2048 Икс 1365 px

  коричневый и черный еж, животные, природа, листья, глубина резкости

• 4862 Икс 3620 px

  коричневый лев обои, мордочка, грива, хищник, взгляд, звериная тематика

• 1920 г. Икс 1200 px

  Sonic the Hedgehog обои, Хэллоуин, представление, синий

• 1920 г. Икс 1270 px

  коричневый ёжик, макро, городской, животные, млекопитающие, животные темы

• 1920 г. Икс 1080 px

  sonic shadow the hedgehog Video Games Sonic HD Art

• 1920 г. Икс 1200 px

  Sonic Sonic the Hedgehog HD, видеоигры

• 2048 Икс 1459 px

  Портрет тигра, тигровое животное, глаза, морда, хищник, Amazing Animals

• 1920 г. Икс 1080 px

  Sonic the Hedgehog, спидометр, видеоигры, представление

• 1600 Икс 900 px

  Sonic Sonic the Hedgehog Sega HD, видеоигры

• 3840 Икс 2160 px

  Соник, 2020, Еж, Ежик Соник

• 3000 Икс 1505 px

  Соник, Еж Соник (2020)

• 1920 г. Икс 1200 px

  Sonic Sonic the Hedgehog HD, видеоигры

• 1600 Икс 900 px

  sonic the hedgehog 1600×900 Видеоигры Sonic HD Art

• 1920 г. Икс 1080 px

  Sonic Boom — Sonic And Tails, еж Соник, игры, 1920×1080

• 1920 г. Икс 1080 px

  серый ежик, трава, листья, осень, колючки, дикая природа животных

• 1920 г. Икс 1080 px

  Sonic the Hedgehog Sega HD, видеоигры

• 1920 г. Икс 1200 px

  Цифровые обои Sonic the hedgehog, Sonic Adventure 2, Shadow the Hedgehog

• 1920 г. Икс 1200 px

  Зверёк, ёжик, колючки

• 1920 г. Икс 1080 px

  серый ЭЛТ-телевизор на комоде, Sonic the Hedgehog, ретро-игры

• 1920 г. Икс 1080 px

  Sonic the Hedgehog обои, разноцветные, синие, без людей

• 6000 Икс 4000 px

  коричневый лев, грива, хищник, царь зверей, морда, животное, животная тематика

• 2210 Икс 1265 px

  Соник, Ежик Соник, Ежик Тень

• 1600 Икс 1200 px

  серый еж, животные, дикая природа животных, одно животное, млекопитающее, животные в дикой природе

• 1920 г. Икс 1200 px

  Sonic Sonic the Hedgehog HD, видеоигры

• 1920 г. Икс 1200 px

  коричневый ёжик, трава, листья, осень, колючки, звериная тематика

• 1920 г. Икс 1200 px

  Sonic Hedgehog illustration, Sonic the Hedgehog, движение, позвоночное животное

• 1280 Икс 1024 px

  sonic the hedgehog tails blood 1280×1024 Видеоигры Sonic HD Art

Загрузка обоев

Британское общество охраны ежей

Британское общество охраны ежей — Часто задаваемые вопросы. Пожалуйста, не стесняйтесь копировать, распространять или демонстрировать, чтобы рассказать другим о ежах и о том, как мы можем им помочь.

Какую еду предложить своим посетителям-ежикам?

Лучшее, что можно предложить — это корм для ежей, мясной корм для кошек или собак или полное печенье для кошек. Единственный напиток, который следует предлагать, — это вода (особенно в сухую погоду и при предложении сухого корма).

В моем саду загорает ёжик, ладно?

Нет, это не так. Ежикам нельзя загорать, и если вы видите, что один из них делает это, ему срочно нужна помощь.Используйте садовые перчатки или сложенное полотенце, чтобы поднять его, положите его в ящик с высокими стенками, положив на дно полотенце или флис, согрейте его в закрытой теплой бутылке с горячей водой (даже в жаркую погоду), предложите подходящую еду и воды (см. выше), а затем позвоните в BHPS по телефону 01584 890 801 для получения дальнейших рекомендаций как можно скорее.

Я видел ёжика, который выглядит «пьяным», понятно?

Опять же, нет, это не нормально. Ежики в таком состоянии на самом деле переохлаждены и нуждаются в срочной помощи. Пожалуйста, предложите первую помощь, описанную выше, и позвоните нам как можно скорее.

У всех ежей есть блохи и нужны ли они им?

Не у всех ежей есть блохи; у многих из спасенных их нет. Однако ежам не НУЖНЫ свои блохи, чтобы выжить, это старая женская сказка. Блохи-ежи зависят от хозяина, поэтому, хотя они могут запрыгнуть на кошку или собаку, они не заразят их.

Помогите! Я навредил ежу во время стриминга.

Несомненно, один из самых тревожных звонков, которые мы получаем. ПОЖАЛУЙСТА, тщательно проверьте участки перед стрижкой или скашиванием.Эти травмы обычно ужасны, и ежа часто приходится усыплять, конечно, многие погибают мгновенно в результате такого рода несчастных случаев. Обязательно проверьте на наличие свиней, так как гнездо, которое вы вырубили, может быть детским.

Неужели Ёжики должны выходить на улицу при дневном свете?

Обычно нет. Ежики ведут ночной образ жизни, а это значит, что их не стоит видеть в светлое время суток. Некоторыми исключениями являются беременные самки, собирающие материалы для гнезд непосредственно перед родами, или новая «мама», отдыхающая от гнезда, чтобы добыть пищу и воду, пока ее детеныши спят.Иногда, когда ночи короткие, голодный еж может добывать корм в сумерках и на рассвете. Тем не менее, эти ежи двигались быстро и целенаправленно. Если ёж вялый, лежит, летает вокруг него, шатается или вызывает у вас какие-либо другие причины для беспокойства, пожалуйста, позвоните нам для консультации как можно скорее по телефону 01584 890 801.

Моя собака не любит ёжиков в саду, можешь переместить?

Ответ заключается в том, что, если вы не готовы ёжить весь сад, нет смысла перемещать постоянных ежей, так как другие из местного населения, скорее всего, переедут на освободившуюся территорию.Если вы готовы выполнить эту работу, лучше всего связаться с местным опекуном, чтобы узнать, могут ли они безопасно переместить ежа (избегая сезона деторождения). В противном случае, приучить собаку оставлять ежей в покое — идеальное решение: вывести собаку на прогулку по саду после наступления темноты, использовать намордник и поднять много шума перед тем, как собака выйдет, чтобы предупредить ежа о чем-то. происходит может помочь. У ежей часто есть распорядок дня, поэтому, если вы видите ежа в определенное время, он, скорее всего, будет рядом с этим временем на следующую ночь — не выпускайте собаку в это время.

Хочу ёжика в сад; я могу просто взять один из дикой природы?

Нет! Пожалуйста, не делай этого. Замечательно, что вы хотите пригласить ежей в свой сад, но брать одного из тех мест, где они знают источники пищи и воды, в неизвестное место — нечестно. Что еще более тревожно, у него может быть зависимый птенец в гнезде, без его возвращения гнездо выйдет из строя, и птенец не выживет. Наконец, если в вашем саду еще нет ёжиков, то для этого может быть веская причина.У нас есть буклет по этой теме здесь, или свяжитесь с нами для получения бумажной копии.

Можно ли «пометить» своих ежиков? Мы почти уверены, что ежик предпочел бы не маркировать, но , если вы собираетесь это делать , убедитесь, что вы используете нетоксичный маркер на водной основе и отметьте только несколько колючек ежа. Держите отметину подальше от морды ежа и отметьте ее в саду на земле, а не поднимайте / приносите в дом. Пожалуйста, не используйте красный цвет, так как люди могут принять его за кровь и «спасти» его.Не делайте ежа заметным для хищников. Мы видели очень грустные изображения бедных ежиков, практически покрытых краской! Если вы наблюдаете за ежами на камеру дикой природы, вы часто сможете отличить их друг от друга со временем без необходимости маркировки.

Hedgehog Research — зачем мы это делаем и каковы правила?

Сейчас хорошо известно, что популяция ежей в Британии серьезно сокращается. Самый последний анализ исследований, проведенных в результате совместной работы Британского общества по сохранению ежей и Народного фонда защиты исчезающих видов, показывает, что с начала века городское население сократилось на 30%, а сельское население не менее чем на 50%. .В основе нашего ответа на это знание должна лежать строгая наука. Единственный способ убедить тех, кто несет ответственность за изменения природоохранной политики на национальном уровне, — это представить дело, подкрепленное убедительными доказательствами. Сбор этих доказательств требует дальнейших исследований. А главными сторонниками и инициаторами исследований в пользу ежей в Великобритании являются BHPS и PTES. Все исследовательские проекты должны пройти ряд жестких испытаний, прежде чем их можно будет предпринять.Существуют юридические требования, а также этические и практические аспекты. Юридический В Англии, Шотландии и Уэльсе ежи охраняются Законом о дикой природе и сельской местности 1981 г., Приложение 6, а в Северной Ирландии — Приказом о дикой природе (NI) 1985 г., Приложения 6 и 7. Это означает, что они “ защищен от убийства или захвата определенными методами в соответствии с разделом 11 (1) Закона о дикой природе и сельской местности 1981 года. Перечисленные методы: самоблокирующиеся силки, луки, арбалеты, взрывчатые вещества (кроме боеприпасов для огнестрельного оружия) , или живые приманки.Перечисленные виды также защищены от следующих действий: ловушка, ловушка или сеть, электрическое устройство для убийства или оглушения, ядовитые, отравляющие или оглушающие вещества или любой другой газ или дым, автоматическое или полуавтоматическое оружие, устройство для освещения цели или прицельное приспособление для ночной стрельбы, искусственное освещение, зеркало или другое ослепляющее устройство, звукозапись и машина с механическим приводом, незамедлительно преследуемая ». Лицензирование Лицензии на проведение исследований поступают от Natural England, Natural Resources Wales, Scottish Natural Heritage и Агентства по окружающей среде Северной Ирландии.Лицензия на обследование требуется для работы с ежами, если животные должны быть отловлены или взяты с использованием искусственного освещения, такого как фонарик или прожектор. Лицензия на обследование не требуется: для обследований полевых знаков ежа, для прямого наблюдения или для обследований присутствия / отсутствия, когда они наблюдаются или обнаруживаются без «взятия» (например, отлова или обработки), например для использования туннелей следа, удаленных фотоловушек, или для оценки среды обитания или в целях общего экологического обследования. В дополнение к этому, любой, кто применяет седативные средства к животным в исследовательских целях, должен быть ветеринаром или иметь лицензию в соответствии с Законом о животных (научные процедуры) 1986 года.Сертифицированный институт экологии и природопользования также сформулировал ряд критериев, которые они считают минимумом для проведения исследований: Знания Люди должны знать и понимать:

• статус сохранения
• распределение
• угроз популяциям, диапазону видов (включая интродуцированные популяции) и выживанию видов
• Экология, биология размножения и поведение ежей
• известные экологические требования
• правовая защита
• лицензии и разрешения
• подходящие сезоны обследования
• методов обследования, используемых для обследования ежей (включая отлов, маркировку / маркировку, полевой поиск и использование туннелей для следов и фотоловушек), а также сильные и слабые стороны и ограничения этих методов
• соответствующее оборудование, методы и требования к лицензированию для гуманного отлова живых животных, обращения с ежами и их седации (если мы собираемся использовать эти методы), а также правовые вопросы, связанные с потенциальным приловом
• ряд факторов, которые могут привести к смещению результатов опроса, и ложноотрицательным
• источников информации об известных встречах и распространении ежей (включая NBN Gateway, местные биологические / экологические записи и местные контакты)
• стандарты метаданных / обмен данными
• вопросов здоровья, безопасности и благополучия, обычно связанных с обследованием ежей (включая отлов живого и обращение с дикими животными, если применимо).

Навыки Люди должны обладать навыками и опытом, позволяющими им уверенно:

• Опознавательные знаки для ежиков
• оценить потенциал среды обитания ежей
• объем полевых работ надлежащим образом
• планировать и проводить надежные научные исследования (учитывая влияние сезона и среды обитания на методы исследования)
• использовать соответствующие неинвазивные методы обследования ежей
• анализировать и интерпретировать данные опроса
• примите соответствующие меры предосторожности для здоровья и безопасности.

Если используется треппинг, люди также должны уметь:

• эффективно развертывать и контролировать боевые ловушки
• Законно и гуманно обращаться с живыми ежами
• эффективно записывает биометрические данные живых ежей
• юридически и гуманно маркировать / маркировать ежей (при использовании этой техники)
• правильно обрабатывает диапазон потенциального прилова от живоловок (с должным учетом соответствующего законодательства).

Большая часть этого материала была собрана доктором Ричардом Ярнеллом и доктором Найджелом Ривом от имени CIEEM Таким образом, работа, заказанная BHPS и PTES, должна соответствовать юридическим, практическим и этическим требованиям, изложенным выше.Если есть свидетельства несоблюдения самых высоких стандартов, мы незамедлительно принимаем меры, чтобы выявить, что пошло не так. Иногда внешность обманчива. Термоусадочные пластиковые бирки, которые сейчас являются стандартной техникой маркировки, не требуют расплавления пластика на корешках и не доставляют ежику никаких проблем. Недалеко от людей будут наращивать волосы. Ежиков помечают и отпускают только в том случае, если они здоровы. Бывают случаи, когда ёжику после выпуска становится плохо — и это может огорчить всех, кого это касается.Если вы нашли ежа, который плохо себя чувствует, четко обозначен и участвует в исследовании, пожалуйста, свяжитесь с BHPS, убедившись, что животное безопасно и надежно в картонной коробке (или подобном), чтобы мы могли посоветовать ближайший спасти, а также предупредить исследователей. Без работы, проделанной исследователями, мы не сможем спорить о лучшей защите ежей. Исследования имеют решающее значение для углубления нашего понимания угроз, с которыми сталкиваются ежи, и для выработки ответных мер.

ЕСЛИ ВЫ НАЙДЕТЕ НЕОБХОДИМОГО ПОМОЩЬ ЕЖА, ПОЖАЛУЙСТА, ПОЗВОНИТЕ НАМ ПО ТЕЛЕФОНУ 01584 890 801 КАК МОЖНО СКОРЕЕ.

Африканский карликовый еж — Неукротимая наука

Самый маленький африканский ёжик — общее описание

Африканский карликовый еж — один из 23 существующих (ныне живущих) ежей в мире. Иногда его называют четырехпалым ёжиком, это самый маленький член семейства ёжиков. Африканский карликовый ёжик покрыт крошечными шипами без колючек. Эти шипы отличаются от шипов дикобраза, поскольку они постоянно врастают в кожу животного и не отслаиваются.Движение этих шипов контролируется сокращением мышечной «сумки», называемой orbicularis panniculi , а скручиванию помогают особые морфологические адаптации, такие как наличие коротких тупых гребней на позвонках и широкого таза.

Ателерикс имеет обобщенный план тела и, как и большинство насекомоядных, небольшой мозг и простую желудочно-кишечную систему. У них тупые, широкие коренные зубы и относительно низкая скорость метаболизма, что объясняется их преимущественно насекомоядным питанием.

Где водится Четырехпалый Ёжик?

Ежиков можно встретить на континентах Африки, Азии и Европы. Ателерикс широко встречается в саваннах и степях экваториальной Африки от Сенегала до Эфопии и на юге до реки Замбези, а спорадически встречается в более засушливых регионах Африки.

Они занимают различные среды обитания, в том числе луга, леса, кустарники, заросли, равнины, сельскохозяйственные угодья и даже пригородные сады (их также встречали в конюшнях и зданиях для хранения продуктов в пригородных районах и районах, где содержится домашний скот, что привлекает насекомые). Atelerix предпочитает высоту 2000 метров и ниже и требует участков с сухими почвами; они не встречаются в болотах или густых лесах. Важные особенности среды обитания включают множество укрытий на выбор (они обычно меняют место отдыха каждый день), включая спутанную траву, опавшие листья, скалистые расщелины, термитники (термитники) или ранее вырытые норы. Они предпочитают травянистые участки с легким подлеском.

Поведение

Четырехпалый еж живет поодиночке и собирается вместе только с сородичами (животными одного вида) в период размножения.Эти животные территориальны и будут вести себя агрессивно, если на их территорию будут вторгаться. При территориальной атаке животное поднимает шипы вокруг головы и фыркает, хрюкает, шипит и бодается с обидчиком. Шипы также используются как защитный механизм при уклонении от хищников; Первая линия защиты ежа — свернуться в клубок, шипы которого торчат под противоположными углами, образуя защитный барьер вокруг животного. Ателерикс , как известно, нападает на хищников, вынимая шипы и бросаясь на нападающего.

Африканские карликовые ежи в основном ведут ночной образ жизни, но могут вести сумеречный образ жизни (активны на рассвете и в сумерках). В экстремальных погодных условиях они будут летать (форма летней спячки, вызванная сильной жарой, когда они укрываются, снижают скорость метаболизма и питаются за счет жировых запасов до тех пор, пока условия окружающей среды не улучшатся).

Вокализации включают в себя фырканье, шипение, ворчание и твиттер. Во время ухаживания самцы поют самкам серенаду птичьим криком, а она отвечает шипением, фырканьем и уклончивыми движениями.

Как и все ежи, африканский пигмей проявляет интересное поведение, известное как самопомазание. Это любопытное поведение обычно возникает, когда животное сталкивается с раздражающим веществом; Ежик образует во рту пузырящуюся пену и затем растирает смесью свои шипы. Был замечен один человек, который жевал околоушные железы жабы и помазал себя ядовитой смесью (возможно, это защита от хищников?). Истинная причина самопомазания до сих пор неизвестна ученым, но была выдвинута гипотеза, что оно используется для привлечения внимания мужчин от женщин и подростков от их матери.Хотя его конкретное происхождение неизвестно, ученые знают, что это врожденное (инстинктивное) поведение, поскольку оно наблюдалось у молодых особей, глаза которых еще не открылись.

Репродукция

Африканские карликовые ежи не имеют явного брачного сезона и размножаются круглый год. Они становятся половозрелыми примерно в возрасте одного года. Беременность длится от 30 до 40 дней, размер помета варьируется от двух до десяти детенышей, а у самок обычно один помет в год.Новорожденные (младенцы) рождаются слепыми и обнаженными; белые колючки появляются через два-три дня. Между 8 и 18 днями глаза откроются, и белые детские шипы опадают и заменяются шипами взрослой окраски. В 40 дней детеныши будут сопровождать мать в походах за кормом и будут есть все больше твердой пищи, пока полностью не отлучатся от груди.

Что в меню ежику?

Четырехпалый еж — насекомоядное животное и в основном питается насекомыми (термитами, жуками) и другими членистоногими (пауки, скорпионы, многоножки).Они также потребляют множество других продуктов, включая беспозвоночных (улитки, дождевые черви, слизни, наземные крабы), мелких позвоночных (змеи, ящерицы, лягушки, молодые птицы и яйца) и растительный материал (корни, фрукты, грибы). Некоторые даже были замечены поеданием ядовитых змей!

Добычу обычно определяют по внешнему виду, запаху и звуку, и ее можно найти на глубине до 4 см в почве. Живая добыча схватывается в пасть и шумно пережевывается, после чего облизывается морда. Более крупную живую добычу перед употреблением встряхивают до смерти. Ателерикс охотно поедает падаль, а в пригородных районах они наблюдали, как убирают трупы, убитые на дороге.

Статус сохранения

МСОП (Международный союз охраны природы) относит африканского карликового ежа к категории «менее опасный и наименее опасный». Эти животные обычны в районах подходящей среды обитания, но их не часто можно увидеть из-за их ночных привычек.

Дополнительные ресурсы

Четырехпалые ежи — обычные экзотические домашние животные, которых широко разводят в неволе.

No related posts.